Funcionamiento del proceso de fijación
tisular El órgano de este estudio ha
comenzado ya su proceso de
descomposición por lo que es fijado
después de su extirpación con el fin de
que se conserve de esta manera se
observaran tanto el buen
funcionamiento y estructura del
órgano como la patología de esta.
FIJACION Con la palabra fijación
queremos indicar, en el campo de la
Anatomía Patológica, el
procedimiento mediante el cual
detenemos la destrucción, la
autólisis de las células y el material
extracelular.
CARACTERISTICAS DEL FORMOL
La formalina pura es una solución
concentrada al 40% del gas formaldehido en
agua Se prepara una solución al 10% o al 15%
(10 o 15ml de solución de formaldehido, 90ml
de agua corriente para hacerla más
alcalina).La fijación se realiza a temperatura
ambiente y de un tiempo aproximado en
24-48hs aproximadamente. El volumen del
fijador debe ser al menos diez veces el del
tejido.
EL FORMOL BUFFERADO
Formol bufferado al 10% - 15% (10 o 15ml de
solución de formaldehido, 90ml de agua
corriente para hacerla más alcalina). Cuando
las piezas quirúrgicas son pequeñas o las
muestras son obtenidas por aspiración y de no
existir indicaciones de realizar frotis para
citología, estudios inmunohistoquímicos o de
microscopía electrónica que requieran fijación
especial se colocarán inmediatamente en
formol bufferado al 10% en una relación de10 a
1 fijador/muestra. Para una mejor fijación las
piezas no deben exceder de un espesor de 3
mm y un tamaño de 3 x 2 cm.
FORMOL O FORMALDEHIDO
Es un fijador ampliamente usado por la
buena preservación del tejido produce
poca retracción tisular, es compatible con
la mayoría de las tinciones histológicas. La
fijación normalmente es de 24 a 48 h,
aunque puede ser de 1 a 2 semanas. Si el
tejido va destinado a histoquímica es
suficiente con 12-24 h a 4ºC.
La temperatura que se utiliza
para fijar una muestra biológica
se encuentra entre los 15 y 25°C..
Se hace excepción a la "Biopsia
por Congelación", donde la
solución de formol tiene una
temperatura de 60°C para
acelerar el proceso de fijación.
El formol es quizá el único fijador cuyo mecanismo es
conocido en detalle. Tiene un solo componente
(formaldehído) y por ello la fijación única. La imagen
microscópica que produce es el “estándar de oro”,
reconocida por todos los patólogos. La mayoría de los
métodos de tinción se crearon para tejidos fijados con
formol. Es el fijador más barato que existe por lo tanto
es de elección para los trabajos de rutina en Anatomía
patológica. Es un buen fijador único que determina una
moderado conversación de la estructura tisular. Por
ser buen desinfectante y no endurecer excesivamente
los tejidos. Provoca escasa retracción tisular
DESVENTAJAS El cancerígeno con un nivel de toxicidad
muy alto. La fijación con formol es un proceso muy
lento y en tres etapas: penetración (muy rápida) que
detiene la autolisis La unión covalente que es 12 veces
más lenta que la penetración, y Afecta la recuperación
del ADN, mARN y la eficacia de las pruebas moleculares
y genéticas. La neutralización siempre es incompleta. El
reciclaje aumenta la exposición.
Soluciones fijadoras simples que contiene
formol
Formol Salino Se utiliza para prevenir el
efecto osmótico que provoca el empleo de
disoluciones de formaldehido en agua
destilada
Se prepara añadiendo a la solución de formalina
al 100% una pequeña cantidad de carbonato de
calcio insoluble que queda depositado en el
fondo del recipiente neutraliza esta sal el exceso
de ácido fórmico
Soluciones fijadoras simples que contiene
formol
Formol Tamponado. Se prepara
de la siguiente manera, como
amortiguador se emplea el
tampón fosfato calibrado con ph
de 7.00 a 7.22
Formol cálcico o solución de
baker se prepara añadiendo
cloruro cálcico al 1% a una
solución formalina neutras al 10%
Formol-Acético-Alcohol (F.A.A): Se emplea normalmente en
la fijación de tejidos vegetales. Aunque no preserva muy
bien el citoplasma es un buen fijador para conservar las
estructuras vegetales.
Para preparar 100ml:
Alcohol etílico de
50-70º-----90 ml. Acido
acético glacial-----------5 ml.
Formaldehido
40%------------5 ml.
FIJADOR P.L.P: La solución fijadora PLP
(peryodato, lisina, formaldehído) se emplea
cuando se quiere una alta preservación de
antígenos puesto que su principal capacidad de
fijación se centra en los carbohidratos. Contiene
peryodato sódico que oxida a los azúcares para
formar aldehídos y la lisina forma puentes entre
ellos, produciendo la fijación.
Lisina-HCl: solución 0.2 M en H2O
destilada. Fosfato disódico dibásico:
solución 0.1 M en H2O destilada.
Tampón de fosfato sódico: solución 0.1
M en H2O destilada, pH 7.4.
Paraformaldehído: solución al 8 % en
H2O destilada.
Liquido de Gendre: Es una variación que está
especialmente diseñada para la fijación del
glucógeno y pigmentos derivados de la
hemoglobina. Se prepara por:
Se prepara de la siguiente manera: EN
ALCOHOL ETÍLICO AL
70%.....................................80.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA……………15.0
ml. ÁC. ACÉTICOGLACIAL……….7.5ml
Fijador de Bouin-Hollander: Es una variante del líquido
de Bouin especialmente indicado para la fijación de
los cilindros de biopsia de médula ósea la
conservación, es de 48 horas sin que se produzca
excesivo endurecimiento.
ACETATO NEUTRO DE COBRE……2.5 gr.
ÁC. PÍCRICO……4.0 gr. FORMALINA
CONCENTRADA……10.0 ml. ÁC. ACÉTICO
GLACIAL…1.5 ml. AGUA
DESTILADA…100.0 ml.
Fijador de Müller: Es la disolución acuosa de un fijador
simple de dicromato potásico con la adición de sulfato
sódico su importancia actual radica en que se emplea
para fabricar los fijadores de Orth y de Zenker. Lo que
llamamos solución madre. Está compuesta de:
DICROMATO POTASICO……2.5gr.
SULFATO SÓDICO……….1.0 gr.
AGUA DESTILADA ………100.0 ml.
Fijador de Orth: Se emplea exclusivamente en
ciertas técnicas de fijación de tejido nervioso
Solución stock de Orth: idéntica a la
composición del fijador de Müller. En el
momento de su uso se mezclan:
SOLUCIÓN STOCK………90.0 ml.
FORMULINA CONCENTRADA……10.0 ml.
Solución de B-5 y Zenker-Formol (Liquido de
Nelly): Ambas mezclas son en esencia casi
idénticas.
La solución de Zenker-formol
contiene dicromato potásico y
sulfato sódico.
CLORURO MERCÚRICO……5gr.
DICROMATO POTÁSICO…2.5 gr.
SULFATO SÓDICO …………1 gr. AGUA
DESTILADA C.S.P..100.0 ml
La denominación B5 corresponde en
realidad a una modificación de la de
Zenker.
CLORURO MERCÚRICO...12.0 gr.
ACETATO SÓDICO…. 2.5 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P….200 ml