Técnicas de Biología Molecular deácidos nucleicos

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Técnicas de Biología Molecular deácidos nucleicos
  1. Técnicas de extracción de ADN
    1. Lisis por ruptura mecánica y extracción con disolventes orgánicos
      1. Lisado y purificación con un detergente iónico. Método del CTAB
        1. Método de salting-out
          1. A partir de un lisado celular se pueden separar las moléculas de proteínas y otros contaminantes del ADN mediante la adición de altas concentraciones de sal que hacen que disminuya la solubilidad de las moléculas orgánicas en la fase acuosa.
          2. Método de extracción de ADN con yoduro de sodio como agente caotrópico en un único tubo
          3. Técnicas de ampliación de ADN
            1. qPcr multiplex
              1. Es una variante de la PCR donde se amplifican de forma simultánea en el mismo tubo, distintas secuencias específicas
              2. qPCR
                1. La PCR de tiempo real o cuantitativa, es una variante que se utiliza para cuantificar la amplificación de una secuencia de DNA o mRNA de una muestra
                2. RT-PCR
                  1. La PCR con retrotranscriptasa es una variante de la PCR diseñada para detectar y amplificar muestras de RNA
                3. Técnicas de purificación de ADN
                  1. Cromatografía de intercambio iónico
                    1. Su mecanismo básico es el intercambio reversible de los iones en solución con los grupos funcionales unidos covalentemente a una fase estacionaria insoluble llamada resina
                    2. Comprobación de la integridad del ADN por electroforesis
                      1. conocer la cantidad y calidad del ADN por espectrofotometría, es importante conocer si el ADN obtenido está integro meidnate electroforesis en gel de agarosa o poliacrilamida al 5%
                      2. Cromatografía de permeabilidad
                        1. Separa macromoléculas disueltas por tamaño con base en su elución desde columnas llenas de un gel poroso
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