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Description
Mind Map by Sheila Sosa Caba, updated more than 1 year ago
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Created by Sheila Sosa Caba
over 10 years ago
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Precipitación por
ligandos de afinidad o
inteligentes
- Se logra la precipitación de proteínas
mediante el uso de ligandos que se unen a
la proteína de interés. e utiliza para aislar y
purificar biomoléculas
- Ligando
homobifuncional
- 2 ligandos idénticos unidos
por un brazo espaciador:se
forma una estructura
entrecruzada, la cual, cuando
es lo suficientemente grande,
precipita.
- Condiciones
- -La proteína de interés
debe tener más de un
sitio de unión -El ligando
debe tener una fuerte
afinidad por la proteína
El espacio que conecta a
los dos ligandos debe ser
lo suficientemente largo
Proporción
ligando:proteína
equivalente
- -La proteína de interés
debe tener más de un
sitio de unión -El ligando
debe tener una fuerte
afinidad por la proteína
El espacio que conecta a
los dos ligandos debe ser
lo suficientemente largo
Proporción
ligando:proteína
equivalente
- 2 ligandos idénticos unidos
por un brazo espaciador:se
forma una estructura
entrecruzada, la cual, cuando
es lo suficientemente grande,
precipita.
- Ligando
heterobifuncional
- Unión de un ligando a un
polímero stos polímeros son
hidrofílicos y solubles en agua,
pero cambian reversiblemente a
hidrofóbicos e insolubles cuando
se alcanzan condiciones críticas.
- Condiciones
- -Contener grupos
reactivos - No
interactuar fuertemente
con el ligando o
impurezas, -Dar una
separación completa de
fases del polímero
-Formar precipitados
compactos, fáciles de
separar y excluir
impurezas -Ser
solubilizado fácilmente.
-Ser accesible y barato
- -Contener grupos
reactivos - No
interactuar fuertemente
con el ligando o
impurezas, -Dar una
separación completa de
fases del polímero
-Formar precipitados
compactos, fáciles de
separar y excluir
impurezas -Ser
solubilizado fácilmente.
-Ser accesible y barato
- Unión de un ligando a un
polímero stos polímeros son
hidrofílicos y solubles en agua,
pero cambian reversiblemente a
hidrofóbicos e insolubles cuando
se alcanzan condiciones críticas.
- Equipo y Material
- Parámetros
experimentales
- -Concentración
de proteína
-Concentración
de ligandos (y
polímeros)
-Temperatura
-pH y fuerza
iónica
-Concentración
de metales
- Rangos:
- Rangos:
- -Concentración
de proteína
-Concentración
de ligandos (y
polímeros)
-Temperatura
-pH y fuerza
iónica
-Concentración
de metales
- Tipos de moléculas
- Proteínas,
enzimas y
anticuerpos
- Proteínas,
enzimas y
anticuerpos
- Ejemplos
- 1) Purificación de
tripsina, utilizando
p-Aminobezamidina
como ligando y
poliacrilamida como
polímero
- 2) Purificación de proteína A
utilizando IgG humana como
ligando y
hidroxipropilmetilcelulosa
como polímero.
- 2) Purificación de proteína A
utilizando IgG humana como
ligando y
hidroxipropilmetilcelulosa
como polímero.
- 1) Purificación de
tripsina, utilizando
p-Aminobezamidina
como ligando y
poliacrilamida como
polímero
- Ventajas
- -Aumenta la
selectividad
-Equipamiento
simple y posible
escalamiento
-Costos accesibles y
manejo sencillo.
Máximo grado de
reducción de
volumen durante el
proceso
- -Aumenta la
selectividad
-Equipamiento
simple y posible
escalamiento
-Costos accesibles y
manejo sencillo.
Máximo grado de
reducción de
volumen durante el
proceso
- Desventajas
- Ligandos
homobifuncionales:
Conocer la
concentración
aproximada de la
molécula objetivo.
Dificultades para
redisolver el
precipitado y recuperar
la molécula objetivo,
consume tiempo, y
solo se pueden utilizar
ligandos y productos
que tengan por lo
menos 2 sitios de
unión
- Lgandos
heterobifuncionales:
el polímero
utilzado puede
atraer proteínas
contaminantes de
unión no específica,
disminuyendo el
nivel de purificación
- Ligandos
homobifuncionales:
Conocer la
concentración
aproximada de la
molécula objetivo.
Dificultades para
redisolver el
precipitado y recuperar
la molécula objetivo,
consume tiempo, y
solo se pueden utilizar
ligandos y productos
que tengan por lo
menos 2 sitios de
unión
- Ligando
homobifuncional
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