Metodos de Cuantificación de Proteínas

Juan Manuel Izaguirre
Mind Map by Juan Manuel Izaguirre, updated 4 months ago
Juan Manuel Izaguirre
Created by Juan Manuel Izaguirre over 6 years ago
116
0

Description

asdfkas

Resource summary

Metodos de Cuantificación de Proteínas
  1. Permiten determinar la cantidad de proteína presente en una muestra, se dividen en
    1. Métodos colorimétricos
      1. Método de Biuret
        1. Fundamento
          1. Formación de un complejo entre el ión cúprico y los enlaces peptídicos para tornar a una coloración violeta
          2. Es necesario
            1. Una solución fuertemente alcalina y el sulfato de cobre que reaccionará con las proteínas
            2. Características
              1. Aplica a partír de los tetrapéptidos hasta todas las proteínas (Longitud).
                1. No depende de la composición de los aminoacidos
                  1. Sensibilidad menor a 1mg de proteína, absorbancia máxima a 550nm
            3. Método de Lowry
              1. Fundamento
                1. Reducción del ión cúprico (Cu+2) a cuproso (Cu+) en un medio alcalino al reaccionar el péptido
                2. Es necesario
                  1. Medio alcalino, reactivo de Folin-ciocalteau para fenoles, se reducirá por los fenoles y dará lugar a la coloración azul
                  2. Características
                    1. El cambio de coloración se logra por la presencia de los aminoácidos Trp y Cys
                      1. Máxima absorbancia a 650nm
                  3. Método del ácido bicinchonínico
                    1. Fundamento
                      1. Reducción del ión cúprico al ión cuproso por los enlaces peptídicos. Estos se unirán a dos moléculas de BCA cambiando su estructura electrónica, generando una coloración púrpura.
                      2. Es necesario
                        1. El reactivo BCA, la solución alcalina, el ión también se reducirá por los aminoácidos aromáticos
                        2. Características
                          1. Es considerado uno de los métodos más sensibles y simples
                            1. Máxima absorción a 562nm
                              1. Es necesaria la presencia de los aminoácidos aromáticos para la reducción del ión
                        3. Método de Bradford
                          1. Fundamento
                            1. Unión del colorante azul de Coomassie a las proteínas, sensible a los residuos arg, trp tyr, his y phe.
                            2. Es necesario
                              1. Un medio ácido, proteínas libres de detergentes, el colorante azul de coomassie
                              2. Características
                                1. Absorbancia máxima de 465 a 595nm
                                  1. Como ventaja es más sencillo en comparación con los otros métodos colorimétricos
                                    1. Como desventaja es sensible por contaminantes, como los detergentes
                                      1. Muy sensible, detecta de 1 a 15 microgamos
                            3. Métodos espectroscópicos
                              1. Espectro de proteínas a 280 nm
                                  1. Fundamento
                                    1. Propiedad de los aminoácidos aromáticos de absorber luz UV a 280 nm
                                    2. Es necesario
                                      1. Muestra a utilizar y un espectofotómetro
                                      2. Características
                                        1. Se comparan los resultados con una curva estándar
                                          1. Se utiliza para cuantificar concentraciones de 20-3000 ug/mL
                                      3. Espectro de proteínas a 205nm
                                        1. Fundamento
                                          1. Propiedad de los enlaces peptídicos de absorber luz UV a 205 nm
                                          2. Es necesario
                                            1. Muestra a utilizar y un espectofotómetro
                                            2. Características
                                              1. Se comparan los resultados con una curva estándar
                                                1. Se utiliza para cuantificar concentraciones de 1-100 ug/mL
                                            3. Emisión de Fluorescencia
                                              1. Fundamento
                                                1. Usa la capacidad de los aminoácidos aromáticos de producir fluorescencia para detectar las proteínas presentes en una muestra.
                                                2. Características
                                                  1. Generalmente se mide la emisión del triptófano y se calcula a partir de una curva de calibración estándar
                                                    1. Se utiliza para cuantificar proteínas de 5-50 ug/mL
                                              2. Otros métodos
                                                1. RP-HPLC
                                                  1. Fundamento
                                                    1. Añadir la muestra en HCl 10N y pasar la muestra por la columna, es muy específico el análisis determinando los aminoácidos
                                                    2. Es necesario
                                                      1. Concentración de proteína de 0.05nmol o de 2.5ug, solución de HCl 10N, material sofisticado para la RP-HPLC
                                                      2. Características
                                                        1. Permite la caracterización de las proteínas
                                                          1. Es el método más específico para determinar la cantidad de proteína
                                                      3. ELISA
                                                        1. Fundamento
                                                          1. Se basa en la capacidad de una proteína para unirse a un determinado anticuerpo, la unión se detecta por la acción de degradación de una enzima sobre un determinado sustrato colorimétrico.
                                                          2. Se necesita
                                                            1. Anticuerpos específicos conjugados con la enzima, sustrato determinado que genere color y la muestra
                                                            2. Características
                                                              1. Es cuantificación indirecta de una proteína específica realizada por la cantidad o tono de color obtenido
                                                        2. VDJ
                                                            Show full summary Hide full summary

                                                            Similar

                                                            MAPA MENTAL
                                                            blanca beatriz m
                                                            MAPA MENTAL DISEÑO GRAFICO
                                                            puntoideascali
                                                            MAPA MENTAL DISEÑO GRAFICO
                                                            Lizbeth Domínguez
                                                            MAPA MENTAL DISEÑO GRAFICO
                                                            Lizbeth Domínguez
                                                            Mapa Conceptual
                                                            Julio Perez
                                                            TEORIAS CONTEMPORANEAS
                                                            karen lorena miranda rojas
                                                            MAPA MENTAL ANALISIS FODA
                                                            Rosa Isela Torres
                                                            Mapa Conceptual
                                                            natalia forteza
                                                            Mapa Conceptual
                                                            Brisa Jimenez Robles
                                                            "Sin la aplicación en el mundo, el valor del conocimiento disminuye en gran medida"
                                                            Manueladepombo
                                                            Aditivos en nutricion animal: presente y futuro.
                                                            Alfredo Ortega