3601698
Description
Mind Map by Juan Manuel Izaguirre, updated more than 1 year ago
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Created by Juan Manuel Izaguirre
over 8 years ago
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Metodos de Cuantificación de
Proteínas
- Permiten determinar la cantidad de proteína
presente en una muestra, se dividen en
- Métodos
colorimétricos
- Método de Biuret
- Fundamento
- Formación de un complejo entre el
ión cúprico y los enlaces peptídicos
para tornar a una coloración violeta
- Formación de un complejo entre el
ión cúprico y los enlaces peptídicos
para tornar a una coloración violeta
- Es
necesario
- Una solución
fuertemente alcalina y
el sulfato de cobre que
reaccionará con las
proteínas
- Una solución
fuertemente alcalina y
el sulfato de cobre que
reaccionará con las
proteínas
- Características
- Aplica a partír de los
tetrapéptidos hasta todas
las proteínas (Longitud).
- No depende de la
composición de
los aminoacidos
- Sensibilidad menor a 1mg
de proteína, absorbancia
máxima a 550nm
- Sensibilidad menor a 1mg
de proteína, absorbancia
máxima a 550nm
- No depende de la
composición de
los aminoacidos
- Aplica a partír de los
tetrapéptidos hasta todas
las proteínas (Longitud).
- Fundamento
- Método de Lowry
- Fundamento
- Reducción del ión cúprico
(Cu+2) a cuproso (Cu+) en
un medio alcalino al
reaccionar el péptido
- Reducción del ión cúprico
(Cu+2) a cuproso (Cu+) en
un medio alcalino al
reaccionar el péptido
- Es
necesario
- Medio alcalino,
reactivo de
Folin-ciocalteau
para fenoles, se
reducirá por los
fenoles y dará lugar
a la coloración azul
- Medio alcalino,
reactivo de
Folin-ciocalteau
para fenoles, se
reducirá por los
fenoles y dará lugar
a la coloración azul
- Características
- El cambio de
coloración se logra por
la presencia de los
aminoácidos Trp y Cys
- Máxima absorbancia a 650nm
- Máxima absorbancia a 650nm
- El cambio de
coloración se logra por
la presencia de los
aminoácidos Trp y Cys
- Fundamento
- Método del ácido
bicinchonínico
- Fundamento
- Reducción del ión cúprico al ión cuproso
por los enlaces peptídicos. Estos se
unirán a dos moléculas de BCA
cambiando su estructura electrónica,
generando una coloración púrpura.
- Reducción del ión cúprico al ión cuproso
por los enlaces peptídicos. Estos se
unirán a dos moléculas de BCA
cambiando su estructura electrónica,
generando una coloración púrpura.
- Es
necesario
- El reactivo BCA, la
solución alcalina, el ión
también se reducirá por
los aminoácidos
aromáticos
- El reactivo BCA, la
solución alcalina, el ión
también se reducirá por
los aminoácidos
aromáticos
- Características
- Es considerado uno de
los métodos más
sensibles y simples
- Máxima
absorción a
562nm
- Es necesaria la
presencia de los
aminoácidos
aromáticos para la
reducción del ión
- Es necesaria la
presencia de los
aminoácidos
aromáticos para la
reducción del ión
- Máxima
absorción a
562nm
- Es considerado uno de
los métodos más
sensibles y simples
- Fundamento
- Método de Bradford
- Fundamento
- Unión del
colorante azul de
Coomassie a las
proteínas,
sensible a los
residuos arg, trp
tyr, his y phe.
- Unión del
colorante azul de
Coomassie a las
proteínas,
sensible a los
residuos arg, trp
tyr, his y phe.
- Es
necesario
- Un medio
ácido, proteínas
libres de
detergentes, el
colorante azul
de coomassie
- Un medio
ácido, proteínas
libres de
detergentes, el
colorante azul
de coomassie
- Características
- Absorbancia máxima
de 465 a 595nm
- Como ventaja es
más sencillo en
comparación con los
otros métodos
colorimétricos
- Como desventaja es
sensible por
contaminantes,
como los
detergentes
- Muy sensible,
detecta de 1 a
15 microgamos
- Muy sensible,
detecta de 1 a
15 microgamos
- Como desventaja es
sensible por
contaminantes,
como los
detergentes
- Como ventaja es
más sencillo en
comparación con los
otros métodos
colorimétricos
- Absorbancia máxima
de 465 a 595nm
- Fundamento
- Método de Biuret
- Métodos
espectroscópicos
- Espectro de
proteínas a
280 nm
- Fundamento
- Propiedad de los aminoácidos
aromáticos de absorber luz
UV a 280 nm
- Propiedad de los aminoácidos
aromáticos de absorber luz
UV a 280 nm
- Es necesario
- Muestra a utilizar y un
espectofotómetro
- Muestra a utilizar y un
espectofotómetro
- Características
- Se comparan los
resultados con una
curva estándar
- Se utiliza para cuantificar
concentraciones de 20-3000
ug/mL
- Se utiliza para cuantificar
concentraciones de 20-3000
ug/mL
- Se comparan los
resultados con una
curva estándar
- Espectro de
proteínas a
205nm
- Fundamento
- Propiedad de los enlaces
peptídicos de absorber luz
UV a 205 nm
- Propiedad de los enlaces
peptídicos de absorber luz
UV a 205 nm
- Es necesario
- Muestra a utilizar
y un
espectofotómetro
- Muestra a utilizar
y un
espectofotómetro
- Características
- Se comparan los
resultados con una curva
estándar
- Se utiliza para cuantificar
concentraciones de 1-100
ug/mL
- Se utiliza para cuantificar
concentraciones de 1-100
ug/mL
- Se comparan los
resultados con una curva
estándar
- Fundamento
- Emisión de
Fluorescencia
- Fundamento
- Usa la capacidad de los aminoácidos
aromáticos de producir fluorescencia
para detectar las proteínas
presentes en una muestra.
- Usa la capacidad de los aminoácidos
aromáticos de producir fluorescencia
para detectar las proteínas
presentes en una muestra.
- Características
- Generalmente se mide la emisión del
triptófano y se calcula a partir de una
curva de calibración estándar
- Se utiliza para cuantificar
proteínas de 5-50 ug/mL
- Se utiliza para cuantificar
proteínas de 5-50 ug/mL
- Generalmente se mide la emisión del
triptófano y se calcula a partir de una
curva de calibración estándar
- Fundamento
- Espectro de
proteínas a
280 nm
- Otros métodos
- RP-HPLC
- Fundamento
- Añadir la muestra en HCl 10N y
pasar la muestra por la columna,
es muy específico el análisis
determinando los aminoácidos
- Añadir la muestra en HCl 10N y
pasar la muestra por la columna,
es muy específico el análisis
determinando los aminoácidos
- Es
necesario
- Concentración de
proteína de 0.05nmol
o de 2.5ug, solución
de HCl 10N, material
sofisticado para la
RP-HPLC
- Concentración de
proteína de 0.05nmol
o de 2.5ug, solución
de HCl 10N, material
sofisticado para la
RP-HPLC
- Características
- Permite la caracterización
de las proteínas
- Es el método más
específico para determinar
la cantidad de proteína
- Es el método más
específico para determinar
la cantidad de proteína
- Permite la caracterización
de las proteínas
- Fundamento
- ELISA
- Fundamento
- Se basa en la capacidad de una proteína para
unirse a un determinado anticuerpo, la unión
se detecta por la acción de degradación de
una enzima sobre un determinado sustrato
colorimétrico.
- Se basa en la capacidad de una proteína para
unirse a un determinado anticuerpo, la unión
se detecta por la acción de degradación de
una enzima sobre un determinado sustrato
colorimétrico.
- Se
necesita
- Anticuerpos específicos conjugados
con la enzima, sustrato determinado
que genere color y la muestra
- Anticuerpos específicos conjugados
con la enzima, sustrato determinado
que genere color y la muestra
- Características
- Es cuantificación indirecta de una
proteína específica realizada por la
cantidad o tono de color obtenido
- Es cuantificación indirecta de una
proteína específica realizada por la
cantidad o tono de color obtenido
- Fundamento
- RP-HPLC
- Métodos
colorimétricos
- VDJ
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