COLORANTES, TINCIONES DE RUTINA Y ESPECIALES EN HISTOQUÍMICA

Marco Rojas
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COLORANTES, TINCIONES DE RUTINA Y ESPECIALES EN HISTOQUÍMICA
1 La coloración: es el proceso mediante el cual un cuerpo es teñido por una sustancia colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado al preparar la solución colorante. Con el fin de localizar y determinar ciertas sustancias o elementos que se encuentren presentes en el tejido tiñéndole de un color característico para su identificación.
2 proceso mediante el cual un cuerpo es tenido por una sustancia colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado al preparar la solución colorante. con el fin de localizar y determinar de manera científica ciertas sustancias o elemento presentes en los tejidos dando un color característico
2.1
3 CLASIFICACION DE COLORANTES
3.1 Naturales: Son aquellos extraídos de plantas, animales y minerales. Mantienen sus propiedades
3.1.1 • Animales: Como el carmín, que se extrae de la cochinilla. En técnica histológica se utiliza el carmín de Best para demostrar glucógeno, el carmín de Mayer para demostrar mucina; las células fagocíticas se evidencian con el carmín de litio (colorante vital)
3.1.2 • Vegetales: Como la hematoxilina, obtenida de la corteza de un árbol, el “palo de campeche” (Haematoxilum campechanum), la safranina que se extrae de una liliacea (pistilos de la flor de azafran) o la orceína que se obtiene de un liquen
3.2 Artificiales o Sintéticos: Son productos derivados de la destilación de la hulla o carbón. Genéricamente se les conoce como colorantes derivados de la anilina
3.2.1 • Colorantes ácidos: Son los que tiñen muy bien estructuras básicas.
3.2.2 •Colorantes básicos: Son los que tiñen muy bien estructuras acidas.
3.2.3 • Colorantes neutros: Son sales con componentes ácidos y básicos
3.3 Indiferentes: No forman sales. Son compuestos no iónicos incapaces de la disociación electrolítica. Son insolubles en agua pero solubles en solventes orgánicos como el alcohol y también en las grasas o lípidos y, aunque ellos poseen color, en realidad estrictamente hablando no son colorantes
3.3.1 Basándose en que son solubles en las grasas, estas sustancias se utilizan para demostrar la presencia de ellas en células y tejidos, pues tiñen selectivamente a los lípidos
4 LAS COLORACIONES PUEDEN SER
4.1 Ortocromática: Es la acción de tinción que ejerce un colorante al colorear una determinada estructura con su propio color. La gran mayoría de los colorantes producen coloración ortocromática.
4.2 Metacromatica: Es la tinción en la cual, un colorante además de ceder su propio color a una estructura celular o tisular también tiñe de color distinto a otras estructuras
5 TINCIONES DE RUTINA
5.1 COLORACION DE HEMATOXILINA -EOSINA (H&E)
5.1.1 a)os núcleos mediante una hematoxilina, previamente oxidada y transformada en hemateina a la que se le añade una sustancia mordiente para formar una laca (para tal fin se usan sales metálicas de aluminio, plomo o fierro). Los núcleos se colorean de azul, azul morado, violeta, pardo oscuro o negro, dependiendo de los agentes oxidantes y mordientes que se utilizaron.
5.1.1.1 1.-Desparafinar é hidratar. 2.-Hematoxilina de Harris…3-5min. 3.-Lavar en Agua. 4.-Diferenciar y Virar. 5.-Lavar en Agua. 6.-Eosina…3min. 7.-Lavar en Agua. 8.-Deshidratar, Aclarar y Montar.
5.1.1.1.1
5.1.2 b) el citoplasma y material extracelular utilizando la eosina que les confiere diversos grados de color rosado.
5.1.2.1
5.2 PERIODIC ACID–SCHIFF (PAS).
5.2.1 Utiliza PAS, ácido peryódico de Schiff, es un colorante incoloro pero que se torna rojo estable al contacto con los grupos aldehídos. Demuestra el glucógeno y mucosustancias neutrales, esboza las membranas basales, y pone en evidencia la mayoría de los tipos de hongos y parásitos
5.2.1.1
5.3 COLORACIÓN CON AZÁN:
5.3.1 Es una tinción tricrómica en la cual se obtiene tres colores diferentes: • Azul oscuro en los núcleos de la célula; • rojo en el músculo, queratina y citoplasma celular, • azul claro en el mucinógeno y colágeno, osea en el tejido conjuntivo
5.3.1.1
5.4 COLORACIÓN CON HEMATOXILINA FÉRRICA:
5.4.1 útil para estudiar detalles celulares finos. Ej. Las fibras elásticas y las mitocondrias presentes en el citoplasma de ciertas células
5.4.1.1
5.5 TRICRÓMICO DE CAJAL Y GALLEGO:
5.5.1 implica el uso de tres colorantes. Para demostración diferencial y selectiva de las fibras colágenas y del músculo.
5.5.1.1
5.6 LA ORCEÍNA Y LA FUCSINA RESORCINA:
5.6.1 son colorantes para fibras elásticas. Se observan entre bordeau y castaño oscuro.
5.6.1.1
6 TINCIONES ESPECIALES
6.1 TINCIÓN TRICRÓMICA DE MASSON
6.1.1 Es una técnica de coloración especial que permite visualizar claramente las fibras de colágeno tipo I que forman fibras gruesas o haces Tiñe de azul oscuro el núcleo celular; de azul claro, el colágeno y la mucinógeno y de rojo el musculo, el citoplasma celular o la queratina
6.1.1.1 • 2x10 min en xileno para desparafinar • 2x10 min en etanol 100º • 10 min en etanol 96º • 10 min en etanol 80º • 10 min en etanol 50º • 5 min en agua destilada • 5 min en Hematoxilina férrica de Weigert (10 min si el colorante lleva más de 5 días hecho) • 5 min en agua corriente para diferenciación • 3 min lavado en agua destilada • 5 min en fucsinaescarlata. • 2 min lavado en agua destilada • 15 min en ácido fosfomolíbdico al 5% en agua destilada. • 10 min en verde luz al 2 % (puede ser sustituido por azul de anilina). • Unos segundos en agua destilada. • 3 min de diferenciación con ácido acético al 1% en agua destilada • Deshidratado rápido, unos segundos, en etanol de graduación creciente: 80º, 96º y 100º • 2x10 min en xileno
6.1.1.1.1
6.2 TINCIÓN TRICRÓMICA DE GOMORI
6.2.1 Esta técnica combina un colorante plasmático (cromotropo 2R) y un colorante de fibras conectivas (verde luz/azul de anilina) en una solución de ácido fosfotúngstico y ácido acético glacial.
6.2.1.1 • 2x10 min en xileno para desparafinar. • 2x10 min en etanol 100º • 10 min en etanol 96º • 10 min en etanol 80º • 10 min en etanol 50º • 5 min en agua destilada. • 1h líquido de Bouin a 56-60 ºC, o 24 h a temperatura ambiente • Lavados en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo. • 10 min en hematoxilina de Weigert. • 5 - 10 min en agua corriente. • 15 min en solución tricrómica. • 1 min en ácido acético al 1 %. • 30 s en agua destilada • 1 min en etanol 100º • 1 min en etanol 100º • 2 min en xileno • 3 min en xileno • Montado de las secciones
6.2.1.1.1
6.3 TÉCNICA DEL ROJO CONGO
6.3.1 Se usa para teñir preparaciones microscópicas, especialmente en tinciones para el citoplasma y los eritrocitos. Verde manzana por birrefringencia de tinciones de rojo congo bajo luz polarizada es indicativo de presencia de fibras amiloides
6.3.1.1 • Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60º. • Alcohol absoluto-5min. • Alcohol 96º-5min. • Alcohol 70º-5min. • Lavar en H2O destilada. • Hematoxilina de Carazzi o de Weigert 10 min. • Lavar en agua corriente - 10 min. • Solución Rojo Congo - 10 min. • Lavar en agua corriente - 5 min. • Yoduro potásico --3-4 min. • Lavar con agua corriente. • Alcohol de 70º • Alcohol de 96º. • Alcohol absoluto. • Xilol.
6.3.1.1.1
6.4 TECNICA DE GRIMELIUS
6.4.1 Se utilizan principalmente para la identificación de las células neuroendocrinas y sus tumores, también para la demostración de fibras de reticulina, melanina y calcio
6.4.1.1 • Desparafinar é hidratar. • Solución de Plata 58* a 60*C…3Hrs. • Lavar en Agua. • Solución de Hidroquinona 40* a 45*C…1:30Hrs. • Lavar en Agua. • Deshidratar, Aclarar y Montar.
6.4.1.1.1