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Técnicas empleadas para detectar y cuantificar los antígenos y anticuerpos.

Tipo I: Exceso de Ac

Analizado+ Anticuerpo = complejo analizado-anticuerpo + Anticuerpo residual.

Observar la distribución del anticuerpo, entre el complejo y la parte residual.

Tipo II: Exceso de analizado.

Analizado + anticuerpo = complejo analizado-anticuerpo + analizado residual.

Observar la distribución del analizado.

Pueden emplearse reactivos

Marcados

Sin marcar

Métodos

Inmunoanálsis de partículas

Eritrocitos.

Armazones de látex.

Poliglicilmetacrilato.

Sales de oro y de colorante en dispersión.

Como

Tipos

Pruebas de aglutinación de partículas

CARACTERÍSTICAS

Reacción serológica clásica.

Alto grado de sensibilidad.

Se pueden detectar mediante el uso de partículas recubiertas de antígeno o de anticuerpo.

Gran cantidad de antígenos.

Comprende la aglomeración de una suspensión celular mediante un anticuerpo específico.

CLASIFICACIÓN

Indirecta o pasiva

Directa

Antiglobulina

(Prueba de Coombs)

Como bacterias, hongos u otros organismos,

Pueden emplearse hematíes humanos o partículas inertes como: Bentonita, látex, colodión y carbón vegetal

REACCIÓN DE HEMAGLUTINACIÓN

Enzimoinmunoanálisis (EIA)

Emplea una enzima como marcador para la detección de Antígenos o anticuerpos.

TIPOS

EIA HETEROGÉNEO

ELISA NO COMPETITIVO

ELISA COMPETITIVO

Empleo de antígeno marcado por una enzima.

Mediante conjugados de enzima-anticuerpo.

ELISA tipo “sándwich” no competitivo

ELISA indirecto para medir el Anticuerpo

EIA HOMOGÉNEO

La reacción antígeno anticuerpo no modifica la actividad del marcador enzimático.

La interacción antígeno- anticuerpo modula la actividad de la enzima, lo que hace que desaparezca la necesidad de un paso de separación.

Con antígeno o analizado marcado enzimáticamente.

Con sustrato enzimático marcado.

Con co-factor enzimático marcado.

Análisis con grupo prostético marcado.

Análisis con fosfolipasa C.

Inmunoanálisis con refuerzo enzimático.

Análisis con conjugado de avidina-antígeno y biotina.

Análisis con donador enzimático clonado.

Inmunoanálisis con modulador enzimático.

Enzimoinmunoanálisis con liposomas.

Las enzimas más utilizadas:

- Peroxidasa de rábano

- Fosfatasa alcalina

- β-D-Galactosidasa

- Glucosa oxidasa

- Glucoamilasa

- Anhidrasa carbónica

- Acetilcolinesterasa

- Catalasa

Las enzimas más utilizadas:

- Lisozima

- Malato- deshidrogenasa

- Glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa

- Fosfolipasa-C

- β-D-Galactosidasa

Los Fluoro inmuno análisis siguen el mismo patrón de los EIA, con la diferencia que el marcador es un fluoróforo o compuesto fluorescente.

Inmunoanálisis por fluorescencia o Fluoro Inmuno Análisis (FIA)

INMUNOANÁLISIS

Herterogéneos

FIA en fase sólida

Indirecto (IFI)

Competitivo

Sándwich

Fluoroinmunométrico

Inmunoanálisis de fluorescencia por concentración de partículas (PCFIA)

Análisis inmunofluorométrico por partición radial.

Homogéneos

Realizados con instrumentación estándar

Aumento o disminución de la fluorescencia de los haptenos por el anticuerpo

Inmunoanálisis por transferencia de excitación de la fluorescencia: marcado antigénico directo e indirecto.

Inmunoanálisis de protección de la fluorescencia

Inmunoanálisis de fluorescencia con sustrato marcado (SLFIA).

Radioinmunoanálisis (RIA)

RIA Competitivo

RIA no competitivo

Inmunoanálisis de precipitación

Electroinmunodifusión de dimensión simple

Inmuno electroforéticos

Inmunoanálisis nefelométricos

Turbidimetría

Nefelometría

Western blot (WB)

Far-Western blotting (F-WB)

Double blotting

La siembra de las muestras se realiza al borde de la placa en depresiones y a continuación se efectúa la electroforesis de las muestra en el agar.

Denominado también como Inmunoelectroforesis contra inmuno electro foresis e Inmuno electroforesis cruzada.

Se emplean dispositivos para la dispersión lumínica y la formación de inmunocomplejos se relacionan con el valor de dicha dispersión.

Disminución de la claridad de la luz a causa de su reflexión, dispersión y absorción que ocasionan las partículas existentes en suspensión.

Detección de la energía lumínica dispersa o reflejada hacia un detector que no se encuentra en el camino directo del haz luminoso.

Sigue las leyes de acción de masas, que especifica las relaciones entre la sustancia problema y las proteínas de unión, el anticuerpo o el receptor.

Conocido como análisis inmunoradiométricos (IRMA) o tipo sándwich y aquí se emplea un exceso de anticuerpo.

Citometría de flujo

Determina la estirpe celular, la etapa de maduración o el estado de activación que presenta una célula analizando la expresión de diferentes moléculas en su superficie o en su interior.

KATLEEN GARCIA

MARIA MERCEDES

MOISES RAMOS