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MEDIOS DE CULTIVO
Uno de los sistemas más importantes para la indentificacaón de microorganismos es
Observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo, sus condiciones son:
Temperatura
Grado de humedad
Presión de oxígeno
Acidez o alcalinidad
Nutrientes y factores de crecimiento
Disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener:
Carbono, Nitrógeno, Azufre, Fósforo y Sales inorgánicas
En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras de crecimiento.
Consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como:
Albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido.
Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad.
Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal.
Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos.
Los microorganismos anaerobios estrictos sólo de desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental.
Condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera
Es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos.
Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37°
Luz ambiental
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar.
Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.
pH
La concentración de iones hidrógenos muy importante para el crecimiento de los microorganismo.
La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro
La presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano
Temperatura
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43°C.
Los psicrófilos crecen a 0°C y los temófilos a 80°C o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos).
Los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37°C
Esterilidad del medio
Los medios de cultivo tienen que estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal
El sistema que más se lleva a cabo es el autoclave, se utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante.
Tipos básicos de medios de cultivo
En su estado físico
Líquido
Semisólido
Sólido
No tiene agar
Contiene agar menor al 5%
Contiene agar por encima de un 15%
Estado sólido
Estado líquido
Las células que se multiplican no cambian su localización
Se utiliza para obtener bacterias aisladas por la formación de colonias sobre la superficie
El más utilizado es llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua.
Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración
Se diferencia porque tiene una sustancia de sostén, que puede ser agar-agar
Medios semisólidos
Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificando menor para preparar medios sólidos.
Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias
Según su utilización
Medios comunes
Poseen los componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesitan requisitos especiales.
El medio más conocido es el agar nutritivo o agar común
Medios de enriquecimiento
Incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes.
Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos.
En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los enriquecimiento del mismo.
Medios selectivos
Son utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana.
Su fundamento consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica.
Ejemplo:
El caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el resto de enterobacterias
Medios inhibidores
Se consideran como una variante más restrictiva de los medios selectivos.
Se consiguen habitualmente por adición de sustancias antimicrobianas con desarrollo de una población determinada.
Un medio inhibidor es el MacConkey, permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos.
Medios diferenciales
Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies.
La adición de un azúcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin.
Medios de identificación
Comprueban alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo.
Poseen los medios necesarios para asegurar el crecimiento de los microorganismos
El sustrato específico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado.
Medios de multiplicación
Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado.
Se emplean en la obtención de vacunas, en la investigación y en la industria.
Los medios más adecuados para la multiplicación suelen ser líquidos.
Medios de conservación
Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas razones nos interese mantener.
Se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el laboratorio de microbiología.
Medios de transporte
Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse inmediatamente.
Su utilización debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio.
Atendiendo su composición
Medios complejos
Se preparan a partir de tejidos animales, y más raramente vegetales.
Su composición no es exactamente definida, y por lo consiguiente no es rigurosamente constante.
Medios sintéticos
Contienen en su composición sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada
El agua destilada tiene que ser en proporciones determinadas, resultando un medio de composición perfectamente definida.
Medios semisintéticos
Existe un gran número de factores de crecimiento exigidos para ciertos gérmenes
Esto hace que la fabricación de un medio sintético para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara.
Algunos cultivos comunes
Agar nutritivo
Se utiliza normalmente como rutina para todo tipo de bacteria.
Contiene normalmente (w/v):
- 0.5% Peptona
- 0.3% Extracto de carne/ extracto de levadura
- 1.5% agar
- 0.5% NaCl
- Agua destilada
- pH casi neutro
Agar sangre
Se utiliza para el crecimiento de estreptococos
Para su preparación se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja
Agar C.L.E.D
Cistina Lactosa Electrólito Deficiente
Esta recomendado para el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías urinarios.
Agar S.S
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp.
A partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospecha su presencia.
Agar Hektoen
Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias.
La presencia de tres azúcares (lactosa, sacarosa y salicilina) permiten ampliar el poder diferencial de este medios
Agar McConkey
Se utiliza para el aislamiento de bacilos gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos.
Permite diferenciar bacterias que fermentan lactosa de las no fermentadoras en muestras clínicas, de agua y alimentos.
Contiene sales biliares y cristal violeta, lo que inhibe el crecimiento de bacterias gram positivas.
Agar tripticase de soja
Es utilizado para el crecimiento de gérmenes exigentes como Brucella, Neisseria o Streptococcus.
Es un medio muy enriquecido, pero no es diferencial.
Tiene un bajo potencial redox que, al aumentar, se manifiesta por un color rosa en medio.
Agar Chapman o manitol salino
Permite el crecimiento de un determinado grupo de bacterias mientras que inhibe el crecimiento de otras.
Es capaz de distinguir los microorganismos patogénicos en un corto periodo de tiempo.
Contiene una alta concentración de 7.5%-10% de sal (NaCl), haciéndolo selectivo para Staphylococci y Micrococcaceae debido a que el nivel de sal es inhibitorio para la mayoría de las bacterias.
Tiene la siguiente composición:
5.0 g/L enzima digestiva de caesina.
5.0 g/L enzima digestiva de tejido animal.
1.0 g/L extracto de carne de vaca.
10.0 g/L D- manitol
Pruebas bioquímicas
Consiste en distintos test químicos aplicados a medios biológicos
Al conocer su reacción, nos permite identificar distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento consiste en determinar la actividad de una vía metabólica
Prueba de la coagulasa
Prueba de la catalasa
Permite separar Staphilococcus aureus, que produce la enzima coagulasa, de las otras especies de estafilococos que se denominan coagulasa negativos.
Su técnica varía según la coagulasa investigada
Coagulasa ligada y libre
Se encuentra en la mayor parte de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo
Técnica: se coloca una gota de H2O2 al 30% sobre un portaobjetos y luego se transfiere una porción de colonia sobre H2O2 en el realizándose una emulsión.
Resultados:
Positivo: producción de burbujas (por liberación de oxígeno)
Negativo: no se producen burbujas
Prueba de Oxidasa
Sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas
La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa
Activa la oxidación del citocromo que es reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana
Fermentación de Carbohidratos
Son útiles para complementar los resultados de las pruebas de utilización de los hidratos de carbono
Cuando existe alguna dificultad para la identificación definitiva de un organismos
Producción de ácido sufhídrico en los medios TSI, KLIGGER, SIM
TSI
Tiosulfato de Sodio, es el sustrato necesario para la producción de:
Ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio
SIM
Las sepas móviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puntuación de siembra
Las sepas productoras del ácido sulfhídrico se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro
Kligler
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.
La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables
Citrato
Sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono
Como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio.
Prueba de indol
RM (Rojo de metilo)
Es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptófano.
Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptófano con producción del indol, ácido pirúvico y amoníaco.
Es utilizado para la diferenciación de organismos coliformes en base a las pruebas de Rojo de metilo y Voges.
También es utilizado para la prueba para detectar a los altos productores de ácido.
Informações
- Descrição
- Fluxograma sobre Sem título, criado por Eleonor Rojas Saenz em 27-11-2020.
- Criado por
- Eleonor Rojas Saenz
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