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Identificación y cuantificación de tóxicos no volátiles en una muestra problema

Extracción básica

Muestra problema

Fase acuosa

1) Llevar 10 ml a pH 10 con NaOH al 10 %

2) Extraer dos veces con 10 mL de CH2CL2 por operación

Fase orgánica

1) Secar con Na2SO4

2) Filtrar y concentrar al vacío

3) Reconstituir con 2 mL MeOH

1) HCl concentrado hasta pH 2

2) Extraer dos veces con 15 mL AcOEt

Fracción ESC

Preparar sistema de elución

Fracción AB

R2

R1

Curva de calibración de ácido barbitúrico

Solución stock de ácido barbitúrico 3mg/ml

Designar 5 matraces volumétricos de 10 mL

Blanco

Agua destilada hasta aforo

Solución de 0.45 mg/ml

Solución de 1.80 mg/ml

Solución de 2.40 mg/ml

Solución de 0.90 mg/ml

+1.5 ml stock, aforo con agua destilada

+6.0 ml stock, aforo con agua destilada

+3.0 ml stock, aforo con agua destilada

+8.0 ml stock, aforo con agua destilada

Ajustar espectrofotómetro a cero con "blanco"

+1 ml en tubo de ensaye +0.5 ml solución NaNO2 + 0.1 ml AcOH 2 M + 2.4 ml agua destilada

+1 ml en tubo de ensaye +0.5 ml solución NaNO2 + 0.1 ml AcOH 2 M + 2.4 ml agua destilada

+1 ml en tubo de ensaye +0.5 ml solución NaNO2 + 0.1 ml AcOH 2 M + 2.4 ml agua destilada

+1 ml en tubo de ensaye +0.5 ml solución NaNO2 + 0.1 ml AcOH 2 M + 2.4 ml agua destilada

+1 ml en tubo de ensaye +0.5 ml solución NaNO2 + 0.1 ml AcOH 2 M + 2.4 ml agua destilada

+1 ml en tubo de ensaye +0.5 ml solución NaNO2 + 0.1 ml AcOH 2 M + 2.4 ml agua destilada

Medir absorbancia a 530 nm

R3

1) Colocar referencia de escopolamina en cromatoplaca (carril izquierdo)

2) Colocar muestra de Fracción ESC en carril derecho

1) Mezclar NH4OH y MeOH 9:1

2) Verter en CH2CL2 (proporción 0.1)

3) Saturar por 10 minutos

Elución de cromatoplaca

Visualizar con luz UV (254 nm)

Aplicar revelador de reactivo de Draggendorff

Comparar Rf

R5

R4

Sistema de elución

Ácido gálico + efedrina + ácido propanóico

Fase acuosa

Fase orgánica

HCl concentrado, pH=4

Extracción con disolvente orgánico (acetato de etilo)

Efedrina + ácido gálico (ionizados)

Ácido propanóico (no ionizado)

Fase acuosa

Fase orgánica

NaOH al 10 %, pH=11

Extracción con disolvente orgánico (acetato de etilo)

Ácido gálico (ionizado)

Efedrina (no ionizada)