Congelamento de Tecidos

Congelamento de Tecidos

1. Tecido fresco

   • Fixação física (congelação)
     • hexagonais
       • perfura membranas das células
       • perfura estruturas teciduais
       • causa extravasamento tissulares
       • lento 0ºC a -15ºC
     • cúbicos
       • perf. memb. celular
       • congela estruturas extracelulares mais rápido que intra
       • rápido -50 a -80ºC
     • vítreo
       • imediato -170 a -190ºC
     • realizada c/ micrótomo inoxidável dentro de câmara refrigerada -15 a -30º

2. Rasões

   • diagnóstico rápido
   • demonst. de lipídeos
   • preserv. antigênica
   • preservação de enzimas
   • demonstração de elementos neurológicos

3. Bom congelamento de tecido depende:

   • tamanho da amostra
   • rapidez no processamento
   • crioprotetor
     • aumenta a viscosidade quando abaixo de 0
     • diminui a mobilidade das moléculas de água
     • prevenindo a formação de cristais de gelo
   • eficiência do sist. criogênico
   • capacidade de troca térmica criogênio x amostra
   • velocidade do congelamento
   • formação de gelo vítrio

4. obtenção de amostra de tecido

   • 1 colheita
     • o mais rápido possivel
     • amostra embebida c/ solução salina ou PBS sobre gelo p/ evitar alteração morfológica
   • 2 podem ser diretamente colocadas em frascos criogênicos ou envolvidos em resina de congelação OCT
   • 3 os frascos são imersos no criogênio p/ o congelamento
   • 4 estocagem
     • 1 tecidos e lâminas c/ cortes congelados
     • 2 podem ser estocados mais de 2anos no criogênio ou freezeres -70º

5. preparo dos blocos

   • 1 retira-se as amostras do estoque
   • 2 coloca-as no criostato ou sobre gelo seco
   • 3 prepara-se uma base c/ resina de congelamento (OTC) sobre suporte metálico deixando congelar
   • 3 Sobre esta adere-se o tecido congelado cobrindo a amostra com OCT.

6. criomicrotomia

7. Tecido/ temperatura

   • -12 a -16
     • Cérebro, Linfonodo, Fígado, Rim, Baço, Testículos
   • -18 a -30
     • mama, Pele, Tireóide, Adrenal, Músculo, próstata