PRODUÇÃO DE FFP (GREEN FLUORECENT PROTEIN)

PRODUÇÃO DE FFP (GREEN FLUORECENT PROTEIN)

1. 1 - FERMENTAÇÃO

   • PRODUÇÃO EM MAIOR ESCALA ESCALA DA PROTEÍNA (Escherichia coli )
     • LIMPEZA E ESTERELIZAÇÃO DO EQUIPAMENTO (POPs)
       • CONTROLAR E GUIAR ETAPAS CONFORME BPR
         • ADICIONAR AO BIOREATOR: EXTRATO DE LEVEDURA, CALDO DE SOJA, CLORETO DE AMÔNIO, FOSFATO DISSÓDICO, FOSFATO MONOPOTÁSSICO, AGENTE ANTI-ESPUMANTE E 10 L DE ÁGUA
           • APÓS O REATOR CHEGAR NA TEMPERATURA IDEAL, A GLICOSE É DESPEJADA DENTRO POR MEIO DE UMA MANGUEIRA
             • A CULTURA DE BACTÉRICAS É BOMBEADA PARA O BIOREATOR
               • O PROCESSO É CONTROLADO ELETRÔNICAMENTE
                 • O PROCESSO ESTÁ COMPLETO QUANDO CHEGAR NA TEMPERATURA DESEJADA E VALOR DE CONCENTRAÇÃO ALMEJADO

2. 2 - SEPARAÇÃO

   • A FERMENTAÇÃO É INTRACELULAR
     • ASSIM O PRODUTO (GFP) FICA DENTRO DA CÉLULA PARA A SEPARAÇÃO
       • AS CÉLULAS SÃO SEPARADAS DO LÍQUIDO
         • AS CÉLULAS SÃO LAVADAS ATÉ QUEBRAR AS CÉLULAS E RESTAR APENAS O PRODUTO
           • O PRODUTO É ENVIADO PARA A PURIFICAÇÃO
             • EQUIPAMENTOS UTILIZADOS SÃO: CENTRÍFUGA, HOMOGENEIZADOR E MICROFILTRADOR
               • USA-SE UMA SOLUÇÃO TAMPÃO PARA MANTER O VALOR DE PH DESEJADO
                 • DENTRO DO HOMOGENEIZADOR AS CÉLULAS SE ROMPEM LIBRANDO O PRODUTO
                   • O PRODUTO PASSA PELO MICROFILTRADOR ONDE APENAS O GFP PASSA DEVIDO AO TAMANHO DE 0,22 MICRON NO FILTRO

3. 3 - PURIFICAÇÃO

   • É UTILIZADO UM EQUIPAMENTO DE CROMATOGRAFIA
     • PRESSÃO E TEMPERATURA CONTROLADA
       • SENSORES PARA OBTER A DENSIDADE, CONDUTIVIDADE E PH ESTÃO NO APARELHO
         • QUANDO A DENSIDADE QUE ESTÁ DENTRO DO APARELHO É MAIOR DO QUE A DA SOLUÇÃO QUE ENTROU É SINAL DE QUE ESTÁ PURIFICADO
           • PASSA POR UMA FILTRAGEM DE FLUXO TANGENCIAL ONDE AS MOLÉCULAS MENORES SÃO SEPARADAS DAS MAIORES
             • O TAMANHO DOSPOROS NO FILTRO SÃO MENORES DO QUE O DA SOLUÇÃO DESEJADA, ASSIM O QUE PASSA PELO FILTRO VAI DIRETO PARA DESCARTE
               • É FEITO UMA DIAFILTRAÇÃO PARA RETIRAR RESQUÍCIOS DA SOLUÇÃO TAMPÃP E DA ÁGUA, DEIXAR APENAS O PRODUTO DESEJADO