INMUNOENSAYOS

INMUNOENSAYOS

1. Radioinmunoensayo

   • Fundamento
     • El radioinmunoensayo (RIA) se basa en la competencia que se establece, para unirse a anticuerpos específicos, entre la sustancia a cuantificar y cantidades conocidas de la misma sustancia marcada con un isótopo. Al establecerse esta competición resulta que a mayor cantidad de sustancia a cuantificar, menor será la cantidad de sustancia radiactiva que se une al anticuerpo y viceversa.
       • Ventajas
         • Desventajas
           • Es potencial peligroso ya que trabaja con material radioactivo
         • Técnica altamente sensible. Posibilita la detección de proteínas que se encuentran en baja concentración.
       • Tipos de RIA
         • En el RIA directo, la fase sólida se une una cantidad conocida de Ac y diferentes concentraciones conocidas de antígeno marcado se incuban con una concentración constante de la muestra de la que se desea conocer la concentración del antígeno en cuestión.
           • El RIA de inhibición es una técnica competitiva de análisis donde lo que se une a la fase sólida es una cantidad fija de antígeno. Para el proceso de inhibición se incuba una concentración fija de anticuerpo marcado frente a una serie de diluciones de la muestra que contiene el antígeno
             • La técnica no competitiva denominada sándwich: Se une un Ac en cantidades constantes a la fase sólida. Una vez realizado el bloqueo, se añade el antígeno en concentraciones variables. Posteriormente se añade un segundo anticuerpo contra el antígeno, pero esta vez marcado.

2. Fluoroinmunoensayo

   • Fundamento
     • La fluorescencia es una propiedad de ciertas moléculas que, al ser irradiadas con energía electromagnética de longitud de onda adecuada, emiten radiación de longitud de onda característica permitiendo su cuantificación.
       • Ejemplos moléculas que fluorescen:
         • La Fluoresceína, Rodamina, Texas Red, Cy3 y Cy5
       • Las moléculas de un colorante fluorescente absorben luz en una longitud de onda y convierten la luz absorbida de alta energía (longitud de onda más corta) en luz de menor energía (longitud de onda más larga). Cada fluorocromo tiene un espectro de emisión y excitación característicos; si se utilizan dos con el mismo espectro de excitación pero distinto espectro de emisión, se pueden medir dos características al mismo tiempo (fluorescencia de dos colores).
         • Tipos de FIA
           • INMUNOFLUERESCENCIA DIRECTA: el marcaje directo en el que el anticuerpo primario está marcado con un marcador fluorescente.
             • • INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA: el marcaje indirecto en el que un anticuerpo secundario marcado con un fluorocromo se utiliza para reconocer un anticuerpo primario.
         • Se aplica en :
           • Fármacos: Antibióticos, antiarrítmicos y antidepresivos. Drogas de abuso: Anfetaminas, barbiturico y LSD. Hormonas: Tiroxina y esteroides.

3. Electroinmunoensayo

   • Fundamento
     • Es un tipo de luminiscencia o un inmunoensayo que utiliza la reacción Ag-Ac para el análisis cualitativo o cuantitativo de sustancias en fluidos biológico mediante la emisión de descargas eléctricas.
       • Ventajsa
         • Desventajas
           • La falta de selectividad, ya que un reactivo quimioluminiscente no se limita a un único analito La emisión quimioluminiscente no es constante ya que existe variación de tiempo La emisión quimioluminiscente de varios factores ambientales deben ser controlados
         • Una sensibilidad elevada y cortos tiempos de incubación que arrojan resultados de mejor calidad Un amplio rango de medición que disminuye la necesidad de diluciones y repeticiones, optimizando el tiempo de manipulación y el consumo de reactivos. Permite emplear una instrumentación bastante sencilla, ya que el sistema óptico no requiere fuente externa de excitación.
       • Compuestos químicos más usados:
         • Tris-bispiridil-Rotuleno y la Tripropilamina
       • Esta técnica se considera de campo obscuro y se define como la emisión de radiación electromagnética producida por una reacción química. Cuando esta emisión proviene de organismos vivos o sistemas derivados de ellos, se denomina bioluminiscencia. Ambos fenómenos son procesos luminiscentes.
         • Se aplica en:
           • Hormonas: Testosterona, TSH, T3, T4… Vitaminas: V. B12, V. D…