Upstream

Upstream

1. Primeira etapa: Inóculo

   • Volume de suspensão da célula de interesse na concentração adequada capaz de garantir o desenvolvimento em um volume do meio de cultivo.
     • Alguns objetivos: atingir uma densidade celular correta e promover uma replicação eficiente.

2. Aparellhagem: biorreator

   • Fornece ambiente controlado para crecimento das células.
     • Em escala industrial é comum reatores de aço inoxidável, que é resistente a corrosão, a processos de esterilização e é atóxico.

3. Modos de operação

   • Descontínuo alimentado
     • Adição de substrato durante o processo produtivo e os produtos formados permanecem dentro do reator até o final do processo
       • Vantagem: evita a produção excessiva de produtos, de tal forma que estes sejam aumulados no meio.
   • Contínuo
     • Adição do meio de cultura e a retirada contínua, a fim de atingir um sistema em estado estacionário, no qual não há variação da concentração celular, nutrientes e de produto no meio de cultura.
       • Desvantagem: aumento do risco de contaminação microbiana, perda de capacidade produtiva em cepas geneticamente modificadas.
   • Processo descontínuo (batelada)
     • Consiste na adição do meio de cultura e células no início do processo, sem haver adição de substrato ou retirada do produto até o final da operação.
       • Desvantagem: há perda de tempo que consiste no tempo de descarga e período de lavagem e esterilização
   • Semicontínuo
     • Após o término da operação, parte do meio de cultura é retirado para separação do produto, sendo adicionado no biorreator o mesmo volume do meio de cultura, de modo a adicionar o substrato e restabelecer o volume de trabalho

4. Sistemas de expressão

   • A linhagem CHO é muito utilizada para expressão de proteínas recombinantes, pois apresenta mecanismos enzimáticos de glicosilação muito parecidos com o sistema humano.

5. Banco de células

   • Primeiro passo: compra-se células "originais' do banco de células, faz os controles de qualidade e em seguida é selecionado o clone mais produtivo, faz-se alíquotas deles a armazena em temperaturas abaixo de -100 graus Celsius. Esse é o Banco de Células Mestre.
   • A partir do BCM é produzido as alíquotas que serão usadas na bioprodução, essas células são retiradas do Banco de Células de Trabalho