PCR-REACCIÓN DE LA CADENA DE POLIMERASA

PCR-REACCIÓN DE LA CADENA DE POLIMERASA

1. Qué es?

   • Es una técnica para hacer miles de copias de una determinada región de ADN

2. Ingredientes de la PCR

   • Enzima polimerasa
     • Taq polimerasa, por la bacteria tolerante al calor de la que se aisló (Thermus aquaticus). La Taq polimerasa es ideal para la PCR gracias a esta estabilidad térmica
   • Pimers o Cebadores
     • son
       • Una corta secuencia de nucleótidos que proporciona un punto de partida para la síntesis de ADN.
   • ADN molde
     • A partir del cual se quiere amplificar un fragmento o secuencia determinada. Normalmente es el ADN genómico
   • Nucleótidos
     • Bloques básicos del ADN
   • cofactores
     • MgCl2: lo necesita la Taq para actuar
   • Tampón de la Taq
     • En este tampón se encuentran todos los reactivos necesarios para que la Taq actúe eficientemente, y regula el pH de la reacción.
   • Agua destilada y estéril:
     • En ella se van a diluir todos estos reactivos que componen la mezcla de reacción.

3. Los pasos de la PCR

   • 1. Desnaturalización (96°C): la reacción se calienta bastante para separar, o desnaturalizar, las cadenas de ADN. Esto proporciona los moldes de cadena sencilla para el siguiente paso.
   • 2. Templado (55°C-65°C): la reacción se enfría para que los cebadores puedan unirse a sus secuencias complementarias en el molde de ADN de cadena sencilla.
   • 3. Extensión (72°C): la temperatura de la reacción se eleva para que la Taq polimerasa extienda los cebadores y sintetice así nuevas cadenas de ADN.