INMUNOENSAYOS

INMUNOENSAYOS

1. Radioinmunoensayos (RIA),

   • Esta técnica fué desarrollada por Solomon A. Berson y Rosalyn Yalow en 1960
   • esta técnica se utiliza para detectar y cuantificar sustancias que se encuentran en cantidades muy pequeñas y mezcladas con muchas otras.
   • esta técnica se utiliza para detectar y cuantificar sustancias que se encuentran en cantidades muy pequeñas y mezcladas con muchas otras.
   • RIA directo
     • El RIA se basa en la competencia existente entre el anticuerpo, un antígeno no marcado y una cantidad conocida del antígeno marcado para formar los complejos AgAc o Ag*Ac. Con estos tres componentes (Ag, Ag* y Ac) puede realizarse el ensayo en el que manteniendo constante la cantidad de Ag* y Ac se observará que a mayor cantidad de Ag menos Ag* queda unido a la cantidad fija de Ac (y por tanto menos radiactividad), lo que permitirá relacionar la radiactividad con la concentración de Ag.
   • RIA de inhibición
     • Usado cuando no se puede marcar el antígeno.
   • RIA de sándwich (IRMA)
     • Se inmoviliza una concentración fija del Ac1 (no marcado) en un soporte sólido. Tras lo que se satura el soporte. Se añade la muestra problema (o de calibrado) de Ag. Se añade Ac*2 (marcado) que se una a otro epítopo del Ag. Eliminación del Ac*2 no unido. Se determina la cantidad de anticuerpo marcado unido. A partir de una recta patrón se interpola el valor obtenido para saber la concentración de Ag presente o bien se realiza la recta de calibrado.

2. Fluorinmunoensayos (FIA),

   • es una técnica de inmunomarcación que hace uso de anticuerpos unidos químicamente a una sustancia fluorescente para demostrar la presencia de una determinada molécula
   • La inmunofluorescencia, como técnica de tinción, puede ser utilizada en cortes de tejidos, líneas celulares cultivadas, células individuales y secreciones que contengan células en suspensión
     • finalidad de analizar la presencia y distribución de proteínas, glúcidos y moléculas pequeñas tanto de origen biológico como no.
   • Tipos de inmunofluorescencia
     • inmunofluorescencia primaria, o directa
       • hace uso de un único anticuerpo que se encuentra químicamente unido a un fluorocromo. El anticuerpo reconoce la molécula diana y se une a ella directamente.
       • Reduce el número de etapas necesarias, por lo tanto es más rápida y por otro lado es menos sensible a interferencias debidas a reactividad cruzada de los anticuerpos o a reacciones no específicas, las cuales tienden a aumentar el ruido de fondo de la técnica.
     • La inmunofluorescencia secundaria, o indirecta
       • Hace uso de dos anticuerpos; el anticuerpo primario es el que reconoce y se une a la molécula diana, mientras que el secundario que es el que se encuentra marcado con el fluoróforo, reconoce al primario y se une a él.
       • Esta técnica es posible, debido a que los anticuerpos constan de dos partes, una región variable (que es la que reconoce al antígeno) y una región constante (que es la reconocida por el anticuerpo secundario)

3. Electroquimiluminiscencia (EQLIA)

   • Es un tipo de luminiscencia producida durante las reacciones electroquímicas en las soluciones.
   • muy útil en aplicaciones analíticas como un método altamente sensible y selectiva
   • útil en aplicaciones analíticas como un método altamente sensible y selectiva. que libera un fotón a ~ 620 nm) regenerar con TPrA ( tripropilamina ) en fase líquida o de la interfaz líquido-sólido.
   • En quimioluminiscencia los intermedios generados electroquímicamente se someten a un alta reacción exergónica para producir un estado electrónicamente excitado que entonces emite luz sobre la relajación a un estado de nivel inferior.
   • Electroquimioluminiscencia de excitación puede ser causado por la transferencia de electrón energético (redox) reacciones de especies electrogenerados
   • Tal luminiscencia de excitación es una forma de quimioluminiscencia donde uno o todos los reactivos se producen electroquímicamente en los electrodos.

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