Técnicas Histológicas - uma abordagem prática

Técnicas Histológicas - uma abordagem prática

1. Muitas doenças e processos fisiológicos só puderam ser compreendidos após o desenvolvimento do microscópio.

2. As primeiras observações microscópicas foram feitas em folhas de arvore cortadas, fios de cabelo e cascas de arvore.

3. COLETA DO MATERIAL

   • É um procedimento de retirada da amostra biológica de um organismo vivo ou morto obtidas através de biopsias, peças cirúrgicas e necropsias.
   • Antes de proceder a coleta, deve organizar o espaço, separar os utensílios que serão utilizados e preparar o líquido fixador

4. FIXAÇÃO

   • Objetivos da fixação de tecidos: evitar a autólise e proliferação bacteriana; parar o metabolismo celular, mantendo o conteúdo bioquímico e preservando antígenos; preservar os tecidos para futuras colorações, manter as relações topológicas e morfológicas das biomoléculas o mais próximo da situação “in vivo”; melhorar diferenciação óptica das células preservando sua identidade.
     • Fixação Química
       • Processo de estabilização de biomoléculas pela ação de agentes químicos
     • Fixação Física
       • Conserva através de aquecimento e resfriamento.
   • Principais grupos de fixadores:
     • Agentes oxidantes, agentes desnaturantes, fixadores de mecanismos desconhecidos e fixadores aldeídos e combinações.
   • Principais fatores que influenciam a fixação:
     • Temperatura, volume da mistura fixadora, concentração, ph da mistura fixadora, osmolaridade e espessura da amostra. O volume do fixador deverá ser vinte vezes maior que o tamanho do fragmento de tecido ou peça cirúrgica.

5. CLIVAGEM

   • É o processo de redução de tamanho e espessura dos fragmentos fixados, permitindo a melhor penetração do fixador. Cada órgão fragmento possui um plano ideal de clivagem que deve ser seguido corretamente.
   • A clivagem devera ser realizada com um corte firme unidirecional para tornar a área de interesse evidente.

6. DESCALSIFICAÇÃO

   • Tipos de descalcificadores: ácidos, histoquímicos, soluções descalcificadoras patenteadas, resinas de troca iônica e descalcificadores eletrolíticos.
   • Fatores na escolha do método de descalcificação:
     • A urgência do material, o grau de mineralização ao tecido, a coloração a ser empregada e o tipo de fixador utilizado. Os descalcificadores mais utilizados em laboratórios de patologia são os a base de ácidos.
       • Classificação dos ácidos:
         • Ácidos fracos: Utilizados em tecidos que possuem uma matriz óssea menos densa.
         • Ácidos fortes: Ação rápida, porem causam muitos danos ao tecido. Só devem ser utilizados em amostras que demandam muita velocidade e que apresentem uma grande quantidade de matriz mineralizada, como o fêmur e a tíbia.
   • Procedimento de Descalcificação: Os tecidos mineralizados se já bem fixados devem ser lavados em água corrente. Em seguida deve ser envolto em uma gaze e amarrado com um barbante. O líquido descalcificador deve ser despejado em um frasco de boca larga
     • Com uma ponta do barbante deve ser amarrado em um bastão de vidro. O tecido é imerso na solução calcificadora, e o frasco é colocado sobre uma placa agitadora para acelerar a descalcificação.
       • Ao término da descalcificação os tecidos devem ser lavados em água corrente. O material descalcificado assim como o material não mineraliza do seguem então para a clivagem e depois o processamento

7. PROCESSAMENTO

   • Procedimentos que visam substituir a água que se encontra nos tecidos por meio mais solido que possua resistência e dureza o suficiente para ser cortado.
     • Etapas do processamento de tecidos:
       • Desidratação, clarificação e infiltração.
     • Principais fatores que influenciam o processamento:
       • O tamanho do espécime, os reagentes utilizados, espécie animal (moluscos, insetos), propriedades dos tecidos, presença de vácuo e temperatura durante o processamento.
   • Inclusão:
     • Após o processamento é necessário que o tecido seja incluído em um molde de parafina. Durante a inclusão deve-se seguir algumas recomendações importantes que irão facilitar a microtomia, e ao mesmo tempo permitindo uma análise correta do fragmento.

8. MICROTOMIA

   • Após a inclusão os blocos estão prontos para ser seccionados em fatias finas, assim permitindo a visualização das células e elementos extracelulares através da microscopia de luz. O equipamento responsável por realizar a microtomia é chamado de micrótomo.

9. COLORAÇÃO

   • Após a adesão dos cortes as lâminas eles deverão ser corados, o objetivo deste processo é tornar os tecidos visíveis ao microscópio com o auxílio de soluções corantes.
   • Os fragmentos expostos em lâminas de vidro ao final da microtomia são transparentes e precisam receber corante para melhor visualizar e caracterizar suas células e componentes teciduais com o contexto histológico ou histoquímico.
   • Os corantes imprimem cores aos tecidos por mecanismos físicos e químicos. Após a coloração, as lâminas devem ficar em um meio de selagem permanente, para que analises futuras possam ser realizadas. A histotecnologia acelera o diagnóstico e da maior confiabilidade aos exames.

10. SELAGEM

    • Após a coloração, as lâminas devem ficar em um meio de selagem permanente, para que analises futuras possam ser realizadas. A histotecnologia acelera o diagnóstico e da maior confiabilidade aos exames.

11. OBSERVAÇÃO AO MICROSCOPIO

    • Acelera o diagnóstico e traz maior qualidade e confiabilidade aos exames