Métodos serológicos

Métodos serológicos

1. Todas las muestras de suero se procesarán rutinariamente para la determinación de la IgM contra el sarampión y contra la rubéola.

   • La interpretación de los resultados debe seguir los criterios de validación recomendados por el fabricante de la prueba
   • Para facilitar el seguimiento y las orientaciones técnicas en este documento, el término “indeterminado” incluye todo resultado indeterminado o equívoco.
   • En personas susceptibles expuestas al virus del sarampión o de la rubéola, la prueba para detectar la respuesta de IgM se basará en el momento de aparición de la erupción.
   • Los anticuerpos pueden detectarse durante alrededor de un mes en el caso del sarampión y alrededor de dos meses en el caso de la rubéola.
   • La producción de IgG comienza después de la producción de la IgM, alrededor de 5-10 días después de la aparición de la erupción cutánea, y persiste durante toda la vida de la persona que ha estado expuesta

2. Determinación de los anticuerpos IgM e IgG

   • Existen múltiples métodos para la determinación de los anticuerpos IgM e IgG, como el ELISA, IH, IFA, PRNT
     • La prueba de ELISA es el método recomendado para el sistema de vigilancia, dada su precisión y sensibilidad,
       • Todos los LN usan pruebas comerciales de ELISA para detectar los anticuerpos IgM e IgG contra el sarampión y la rubéola
       • Estos kits de análisis han tenido buen desempeño y han mostrado una alta sensibilidad y especificidad
       • Cuando se sospecha de un resultado negativo falso, en un caso altamente sospechoso, se puede obtener una nueva muestra de suero entre los días 4 -30 días después de la aparición de la erupción, para detección de anticuerpos IgM/IgG.
       • La seroconversión de IgM o IgG permite confirmar el caso

3. Seroconversión de la IgG

   • Cuando se produce una infección por el virus en una persona que no ha tenido un contacto previo, pueden detectarse anticuerpos IgG específicos para el virus unos pocos días después de los anticuerpos IgM.
     • La IgG debería poderse detectar de 5 a 7 días después de la aparición de la erupción y puede alcanzar el valor máximo alrededor de 2-3 semanas después de la aparición de la erupción; en una persona infectada, los anticuerpos persistirán a lo largo de toda la vida.

4. Avidez de la IgG

   • La “avidez” es la fuerza de la unión de los anticuerpos IgG al antígeno.
   • La respuesta inicial al primer contacto del sistema inmunitario con un antígeno es la producción de IgM.
   • Poco después, pueden detectarse anticuerpos IgG con avidez baja y al cabo de unos pocos meses se detectan IgG con avidez alta.
   • La avidez de la IgG depende de la maduración de la IgG, que consiste en el paso de débil a fuerte de la unión de los anticuerpos IgG a un antígeno.

5. Criterios para la confirmación de laboratorio de una infección reciente de sarampión o rubéola

   • En los casos de sospecha de sarampión o rubéola, el cumplimiento de uno de los siguientes criterios confirma una infección reciente:
     • Resultado de IgM-positivo específico para el virus
       • Seroconversión o aumento significativo de los títulos de IgG en sueros pareados (suero de fase aguda y suero de fase de convalecencia
       • Aislamiento del virus o detección de ARN mediante RT-qPCR
       • Detección de una secuencia de tipo salvaj
       • Nexo epidemiológico directo con un caso confirmado por laboratorio
     • La prueba de IgM sigue siendo el análisis rutinario requerido en el sistema de vigilancia de la OPS para confirmar la infección aguda.
       • Un resultado IgM-positivo confirma una infección reciente por el virus, dado el contexto de eliminación en la Región, es aconsejable que cada caso confirmado cumpla con más de uno de los criterios disponibles

6. Suero

   • Para las pruebas serológicas, la muestra de sangre se extrae mediante flebotomía, preferiblemente en un tubo seco con gel separador
   • La sangre se deja coagular y, a continuación, se centrifuga para separar el suero.
   • El suero se transfiere asépticamente a un vial estéril con tapa de rosca.
   • El suero debe mantenerse refrigerado hasta el momento del análisis o debe enviarse con paquetes refrigerantes.
     • Nunca congele un tubo que contenga sangre completa, dado que se puede generar hemólisis.
   • La muestra de suero se utiliza en las pruebas serológicas para la determinación de anticuerpos específicos tipo IgM e IgG.
   • En la vigilancia del sarampión y la rubéola se recomienda la obtención de la muestra de suero al primer contacto del caso con la institución de salud y en un plazo no mayor a los 30 días de la aparición de la erupción
   • Algunos casos, pueden requerir de una segunda muestra de suero, la cual, deberá obtenerse durante la fase convaleciente de la enfermedad, y preferiblemente a los 14 a 21 días después de la obtención de la primera