Flashcards
Cosson cours1 Méthode d'observation et de marquage de la cellule
Flashcards do conjunto (11)
- 1étapes sur la cell pour pouvoir utiliser de l'immunofluorescence1) fixation cell (formaldéhyde)
2) perméabilisation aux IG (saponine)
3) injection IG
4) observation au microscope à fluo - 2Comment marche la GFP?Le gène codant pour la GFP a été isolé et peut être injecté à côté du gène de la prot cible puis lorsque le gène est exprimé alors la prot sera fluo car le gène de la GFP sera aussi exprimé.
dimension temporelle on peut voir bouger les choses - 3Définition de la résolutiondistance minimale qui doit séparer 2 objets pour qu'ils apparaissent distincts
- 4Qu'est ce que la lentille achromatique?lentille composée de 2 verres(Flint et Crown)->évite les abérrations chromatique dues à un seul verre
- 5Quelle est la résolution optimale d'un microscope?lambda/2
lambda=longueur d'onde - 6en quoi consiste l'immunofluorescence direct?1. fixation formaldehyde
2. perméabilisation (saponine)
3. injection mol d'intéret ds lapin->formation anticorps anti-molecule d'intéret->rendre anticorps fluo->injection ds cell->fixation ds cell sur mol d'intéret->observation - 7en quoi consiste l'immunofluorescence indirecte?lorsque'on a les anticorps de lapin->on les injecte ds chèvre->formation anticorps anti-lapin->rendre les anticorps anti-lapin fluo->stockage->utilisable pour n'importe quelle molécule
Avantage:
>amplification signal(car + Igg fluo fixé sur 1 Igg)
>pas besoin de rendre fluo des Igg différents - 8Qu'est ce que la double immunofluo indirecte?utilisation de plusieurs couleur ds une cell
- 9Comment fonctionne le marquage au grain d'or?un grain d'or est lié à anticorps->il absorbe les e- ->visible en microscopie e-
- 10Quel est l'avantage d'un microscope à fluo confocal?image 3D
->reconstitution de voxel(volume pixel) - 11Quel est l'avantage de la GFP?permet d'observer dans le temps!