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TECNICAS HISTOLÓGICAS
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- 1TÉCNICA PARA OBSERVACIÓN DE CÉLULAS VIVAS: ¿Cuáles son?Hay dos:
-Forma directa: sin agregado de colorantes, se usa MO, en especial, contraste de fases y campo oscuro.
-Colores vitales: atraviesan la membrana plasmática y tiñen estructuras sin afectar la viabilidad celular.
a) In vivo o intravital: colorante a animales de experimentación vivos (por ingestión, inyección o inmersión)
b) in vitro o supra vital: colorante a células en cultivo o células en un portaobjetos. Ej. de colorante: azul de metileno (tiñe núcleos de azul y citoplasma celestes) o verde Jano (mitocondrias verdes). - 2TÉCNICA HISTOLÓGICA CONVENCIONAL, ¿Qué hace?Nos permite obtener a partir de un órgano cortes fino de aprox 5-15 um (micrómetro), que se colorean y montan sobre un portaobjetos.
- 3¿Cuáles son los pasos de la THC?1. Obtención de la muestra: biopsia (tejido vivo) o necropsia (podrido), o autopsia (muerto).
2. Fijación: para conservar la estructura de la muestra, detener procesos metabólicos, de degradación o autolisis. Pueden ser físicos: calos (desecación) o frío o químicos: con formaldehido (mediante la formación de enlaces covalentes entre las macromoléculas), alcohol etílico o tetróxido de osmio.
3. Deshidratación: aumentando crecientemente la cantidad y volumen de alcohol (al 100%).
4. Aclaración con xilol, xileno o tolueno. Es solvente orgánico no polar que remueve los restos de alcohol y es miscible en parafina.
5. Molde/Taco: se coloca la muestra en un molde y se vierte parafina (hidrofóbica) para dejarla enfriar y formas un bloque.
6. Corte: del bloque con el microtomo (5 y 10 um), los cortes finos se producen en una estufa para que la parafina se funda y así el corte quede pegado al portaobjetos. De lo contrario pueden desprenderse en el paso siguiente al sumergirlos en xilol.
7. Colocación en el portaobjetos. - 4¿Cuáles son los pasos de la THC?8. Rehidratación: remoción de la parafina con xilol (xq es hidrofobica), se rehidrata con volumenes de alcohol decrecientes.
9.Coloración: con hematoxilina y eosina.
10.Deshidratación: se realiza con concetntraciones de alcohol crecientes y se realiza porque el balsamo de Canadá es hidrofobico.
11. Montaje: se requiere una nueva deshidratación para colocar el balsamo de Canadá y adherir la muestra debido a su caracteristica hidrofóbica. La muestra luego se cubre con un cubreobjeto, una vez que se secó ya esta listo. - 5COLORANTES ¿Cómo son y cuáles son sus cargas netas?basicos: poseen cargas netas +. ej: hematoxilina,azul de metileno,azul de toluidina,verde de metilo y azures.
acidos: tienen carga neta -. ej: eosina,floxina y naranja G. - 6¿Como se le llaman a las estructuras que tiñen? ¿que cargas tienen?acidofilia: estruct cel o extracel con carga neta +, tienen afinidad para unir colorante con carga neta - (acidos).
basofilia: estruct con carga neta - con afinidad por colorantes con carga neta + (basicos).
estas caract dependen de la carga neta propia de las estructuras celulares o tisulares e independientes de los colorantes utilizados. - 7AZUL DE ALCIAN ¿Que es ? ¿Para qué sirve?es un colorante basico con afinidad por estruct con cargas -.
sirve para evidenciar estructuras ricas en polisacaridos acidos como los de la MEC del cartilago (GAGs) o en el interior de las cel caliciformes (mucina). - 8Nombre algunas estructuras celulares o extracelulares acidofilasRER,mitocondrias,ME rica en fibras colagenas,
- 9Nombre algunas estructuras celulares o extracelulares basofilasNúcleo celular,roteinas,ME rica en GAGs.
- 10METODOS HISTOQUIMICOS ¿Qué es la ortocromasia? ¿De que color tiñen?capacidad de los colorantes basicos o acidos de mantener invariable su aspectro de absorción electromagnetica al formar uniones salinas con componentes cel q tiñen.
estructuras se tiñen del color del colorante. - 11METODOS HISTOQUIMICOS ¿Qué es la metacromasia? ¿De que color tiñen?capacidad de algunos colorantes basicos de variar su aspectro de absorción electromagnetica al formar uniones salinas con det comp celulares o extracel caracterizados por poseer polimeros polianionicos.
Tiñen estructuras de un color diferente al propio.
colorantes: tionina,violeta de metilo,azul de bromotimol y azul de toluidina.
estruct metacromaticas: sust intracelular del cartilago por poseer GAGs y granulos de los mastocitos. - 12¿A qué se debe la metacromasia?A la polimerización espontanea de las moleculas del colorante debido a la union a grupos celulares con carga negatica muy proximos unos con otros provocando un cambio en el espectro de absorción del colorante.
- 13¿Para qué se utilizan las tecnicas histoquimicas?Para poner en evidencia determinadas sustancias quimicas en celulas o tejidos mediamente metodos fisicos,quimicos,enzimaticos o inmunoenzimaticos.
- 14SISTEMA NERVIOSO ¿Que tecnicas se utilizan para teñirlo?Nissl: colorantes basicos que se unen a los ac nucleicos.
Cajal: Impregnación argéntica q utiliza sales de Ag que se reducen a Ag0 sobre los neuro-filamentos.
Kluver-barrera: combina un colorante básico y uno para mielina. - 15TECNICA DE PASEs una tecnica histoquimica. su fundamento se basa en la oxidacion con ac peryodico de grupos alcoholes presentes en azúcares,liberando grupos aldehidos de caracter reductor. dsp estos reducen al reactivo de Schiff (fucsina decolorada) tornandolo fucsia.
- 16¿Que evidencia la tecnica de PAS?polisacaridos,glucoproteinas y proteoglucanos.
-mucina
-membranas o laminas basales
-sust intracelular del cartilago
-glucocalix o cubierta celular de la membrana plasmatica de algunas celulas.
-granulos de glucogeno - 17TECNICA DE FEULGENespecifica para evidenciar ADN. Su fundamento se basa en la hidrolisis acida controlada del tejido con ac clorhidrico 1ro, lo que produce la ruptura de las uniones entre las bases del ADN y los azucares, liberandose los grupos aldehidos de los azucares. En segundo paso los aldehidos libres reducen al reaactivo de Schiff haciendo que se torne fucsia.
Al igual que PAS usan el mismo colorante (Reactivo de Schiff) pero tienen distintos fundamentos.
En esta tecnica el ARN se hidroliza por completo - 18TÉCNICA DE SUDÁNno implica ninguna reacicon quimica sino que se usan sustancias coloreadas solubles en lipidos llamados sudanes. Estos colorantes se incorporan en los tejidos atravesando las membranas y quedando retenidos en los lipidos tiñendolos.
El tejido debe ser fijado por congelacion para evitar la perdida de los lipidos por solunilizacion en sv organicos usados en la fijación de THC. - 19TÉCNICAS ENZIMATICASdetección de enzimas celulares las cuales por cortes de tejido se incuban en cond adecuadas con el sustrato especifico para la enzima que se busca evidenciar. Como el producto de la reaccion no es visible se usan reactivos que dan un compuesto coloreado que precipita y es visible al microscopio.
Se detectan: fosfatasa acida (lisosomas),peroxidasa,deshidrogenasas. - 20TÉCNICAS INMUNOHISTOQUIMICASUtilizan anticuerpos especificos como reactivos para la localizacion de determinados componentes celulares en muy poca cantidad. alta sensibilidad de detección.
- 21RADIOAUTOGRAFIAsirve para localizar atomos marcados radiactivamente en los precursores de los aminoacidos que integran las proteinas y los nucleotidos que integran los ac nucleicos presentes en los tejidos.
Se utiliza una emulsion fotografia sensible a la radioactividad para formar una pelicula sobre la superficie, donde hubo emision de radioact aparecen granulos observables al MOCC. - 22HIBRIDACIÓN IN SITUdos molecular de ADN o ARN con complementariedad en la secuencia de bases se unen para formar una doble cadena.
Permite detectar secuencias especificas de ac nucleicos a traves de la union por complementariedad con sondas de ADN monocatenario marcadas radiactivamente.
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- Karteikarten am TECNICAS HISTOLÓGICAS, erstellt von Lucia Sorichetti am 20/03/2021.
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- Lucia Sorichetti
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