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Técnicas y métodos de cultivo microbiano

CESIA RAQUEL AVITIA CANO Microbiología Otro Spanisch 88 Karten

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1Cultivo de los microorganismosConsiste en proporcionarles las condiciones fisicas, quimicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada.
2Crecimiento microbianoAumento del numero de microorganismos a lo largo del tiempo.
3Técnicas de siembra por estriadoEs el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos (puros)
4Medios de enriquecimientoIncorporan una serie de factores que resultan indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes.
5Medios selectivosSon utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población poli microbiana.
6Bacterias entéricasBacterias que provienen del tracto digestivo del hombre y/o animal.
7Medios inhibidoresCuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana, se denomina inhibidor.
8Medios diferencialesSe utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies.
9Técnica de estriado para aislar.Implica una sola inoculación de una sección de placa de Petri y a continuación disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos a tres secciones adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos
10Medios de identificaciónSon los destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo.
11Medios de multiplicaciónSirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado.
12Medios líquidosSon los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión de determinada concentración.
13Medios semi sólidosSe preparan a partir de los medios líquidos, agregando a estos un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias.
14Estructura de las bacteriasEstructuras obligadas y facultativas
15Estructuras obligadasSon las que todas las bacterias tienen, por ejemplo, Pared celular, membrana celular, citoplasma, ribosomas, genoma
16Estructuras facultativasSon aquellas que pueden existir en algunas bacterias pero en otras no. Por ejemplo, Flagelos, cápsula, esporas, inclusiones
y Pili o fimbrias: comunes y sexuales
17¿Cómo se clasifican las bacterias según su forma?En Cocos, bacilos, espirilos,
18CocosDiplococos, estreptococos, estafilococos, sarcinas, tétradas
19DiplococosCocos en pares con un solo plano de división.
20EstreptococosCocos en cadena, en un solo plano de división sucesivo o paralelo
21EstafilococosCocos en agrupaciones irregulares semejantes a racimos de uva en los tres planos del espacio.
22SarcinasSu agrupación se observa en forma de cubos.
23TétradasLlamadas también tetracocos o Gaffakya, aparecen en agrupaciones de 4 unidades.
24BacilosCocobacilos, diplobacilo, estreptobacilo, empalizada.
25CocobaciloBacilos cortos y anchos (parecen cocos pero van a estar aplastados)
26DiplobacilosBacilos en pareja.
27EstreptobaciloBacilos en cadena.
28EmpalizadaBacilos en cadena pero parados.
29Otras formasVibrios, espirilos, espiroquetas
30VibriosBacterias en forma de bastoncillo, curvados con forma de coma o de espiral incompleta.
31EspirilosForma de bacilos largos retorcidos como espirales o hélices rígidos.
32EspiroquetasForma de bacilos largos retorcidos como espirales o hélices flexibles, como resorte.
33Clasificación de las bacterias por su pared celularGrampositivo y gramnegativas
34GrampositivasAl ser teñidos con violeta de genciana, retienen el color, aún después de lavarlas con alcohol.
35GramnegativasNo retiene el color violeta de genciana después de lavarlas con alcohol.
36Clasificación de las bacterias según la disposición de sus flagelosMonotricas, lofotricas, anfítricas, peritricas, atriquias.
37MonotricasCon un solo flagelo en un polo. Ejemplo: género vibrio.
38LofotricasCon un penacho de flagelos en uno o ambos polos, por ejemplo: pseudomona.
39AnfítricasCon un flagelo en cada polo, por ejemplo: en algunas espirales.
40PeritricasCon flagelos distribuidos por la periferia, por ejemplo: enterobacterias.
41Atriquias o atricasSin flagelos.
42Clasificacióon de las bacterias según su nutriciónHeterótrofas, saprófagas, parásitas, autótrofas.
43HeterótrofasBacterias que se alimentan de sustancias previamente elaboradas por otros organismos. Normalmente son patógenas.
44SaprófagasSe desarrollan sobre plantas o animales muertos y los descomponen a la par que se nutren de ellos.
45ParásitasBacterias que toman su alimento de seres con vida (los huéspedes, o sea humanos, etc.)
46AutótrofasUtilizan el CO2 como única o principal fuente de carbono. Tienen necesidades más simples
47Preparación y tinción de la muestra.*Aumenta la resolución.
*Acentúa las características morfológicas.
*Se conserva la muestra.
*Se parte de la obtención de la colonia, los colores impactan directamente en la membrana celular, hay que conocer sus características morfológicas.
48Preparación (Fijación)*Proceso mediante el cual se procesan y fijan en su posición las estructuras internas y externas de la célula,
*Además se mata al microorganismo y se fija firmemente al porta objeto.
49Fijación por calorPreserva la morfología general pero no las estructuras internas.
50Fijación químicaProtege la subestructura fina y la morfología de los microorganismos delicados de mayor tamaño.
51Ejemplos de fijación.*Aldehídicos
*ácido ósmico
*el tetróxido de osmio
*compuestos mercúricos y crómicos
*los alcoholes, la acetona, el dietil-pirocarbonato.
52Colorantes (dyes)Hacen más visibles las estructuras internas y externas aumentando el contraste con el fondo.
Tienen dos características fundamentales: grupos cromóforos y afinidad por los componentes celulares.
53Grupos cromóforos*Grupos químicos con dobles enlaces conjugados.
*Dan al colorante su color.
54Afinidad por los componentes celularesSe unen mediante enlaces iónicos (los más comunes), covalentes o hidrófobos.
55Tipos de tinción.Tinción simple, diferencial y de gram
56Tinción simple.Se emplea un solo colorante. Se dividen en dos clases: colorantes básicos y ácidos.
57Colorantes básicos (tinción simple)*Se emplean frecuentemente.
*Tienen cargas positivas (los colorantes).
*Ej. cristal violeta, fucsina básica, safranina, verde malaquita.
58Colorantes ácidos (tinción simple)*Se emplean menos frecuentemente.
*Tienen carbas negativas.
*Ejemplo: eosina, fucsina ácida
*hongos y levaduras.
59Tinción diferencial*Se emplean 2 o más colorantes.
*Se divide a las bacterias en grupos diferentes según sus propiedades de tinción: tinción de gram y de ácido alcohol resistente.
60Tinción de Gram*Es la tinción diferencial más empleada
*Divide a las bacterias en grupos diferentes según diferencias en la pared celular.
61Tinción negativa*Se emplea frecuentemente para visualizar las cápsulas difusas que rodean a algunas bacterias.
*Se mezclan las bacterias con tinta china o colorante de nigrosina y se extiende sobre un porta.
*Las cápsulas se observan sin color sobre un fondo oscuro.
62Tinción de esporas (método de Schaeffer-Fulton)*Técnica de doble tinción
*Las esporas se tiñen primero calentando las bacterias con verde malaquita.
*Después de desteñir se contratiñe con safranina quedando las células vegetativas y las endosporas con colores diferentes.
*Son difíciles de teñir por eso se observan también en tinciones simples.
63Tinción de flagelos*Los flagelos deben ser recubiertos con suficiente colorante como para ser observados.
*Se aplica mordiente (como ácido tánico y alumbre de potasio) para aumentar el grosor de los flagelos y se tiñen con pararosanilina (método de leifson) o fucsina básica (método de gray).
64Conservación de cepasMicroorganismos totalmente identificados, puros. Detalles específicos. Identificación molecular.
65Los 3 objetivos que hay que alcanzar para conservar correctamente las cepas microbianas en los laboratorios de microbiología son:*El cultivo a conservar sea puro, evitando que se produzcan contaminaciones durante el proceso de conservación.
*Que dure el tiempo de conservación sobreviviendo entre el 70-80%
*Por ultimo que las células bacterianas permanezcan genéticamente estables.
*El ambiente influye mucho y además debe ser manipulado correctamente.
66Conservación por congelación.Se congelan las células en suspensión en un líquido con un agente crioprotector y se guardan a temperaturas inferiores a cero grados centígrados, con lo que el agua se congela. De esta forma, al no disponer las células de agua en forma líquida, no hay crecimiento. Cuando se quiere trabajar con las células así conservadas, se recuperan subiendo la temperatura. Este es el mejor método de conservación desde todos los puntos de vista, pero tiene el inconveniente de requerir aparatos especiales.
67Conservación por Transferencia PeriódicaLa cepa microbiana se guarda en forma de cultivo activo en el medio de cultivo en el que ha crecido. Sin embargo, estas células no pueden permanecer indefinidamente en el mismo tubo, porque al seguir activas excretan productos tóxicos del metabolismo que se acumulan, provocando el envejecimiento y muerte celulares, por lo que es necesario transferirlas a otro tubo con medio de cultivo fresco.
68Conservación por Transferencia PeriódicaEste es el peor método para conseguir la estabilidad genética, puesto que al estar las células creciendo hay una alternancia de generaciones, y al cabo del tiempo las células que se están guardando serán descendientes lejanas de las células iniciales y es posible que ya no se conserven algunas de sus características.
69Desecación en papel filtroSe utiliza un papel bastante absorbente (Whatmann n°3) que se impregna con una solución muy densa de células y se deja secar al aire (en condiciones estériles).
70Desecación en suelo, arena, silica gelSe añaden las células a estos sustratos que las protegerán al desecar. Los microorganismos productores de esporas se pueden conservar durante bastante tiempo por este método.
71Desecación en bolitas de Alginato*Procedimiento bastante eficaz.
*Las células se encuentran en una matriz de alginato y la eliminación del agua se hace por tratamiento con soluciones hipertónicas sucesivas y posterior desecación al aire hasta que se pierde un 70% de su contenido de agua.
72Desecación en sal gorda para Halobacterias.Para su conservación por este método se mezclan las células con sal y se dejan desecar espontáneamente. Debido a la higroscopicidad de la sal, la desecación no es total, pero las células dejan de multiplicarse por ser insuficiente el nivel de agua disponible
73Pruebas bioquímicasConsisten en distintos tests químicos aplicados a medios biológicos en los cuales es conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
*Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
74Pruebas bioquímicasSe emplean para identificar de forma clara y precisa, la presencia o ausencia de una enzima, de un grupo de enzimas, o de una vía metabólica completa en uno o más microorganismos. Son empleadas principalmente la identificación y clasificación de bacterias y hongos.
75Las pruebas bioquímicas pueden ser*Pruebas de identificación rápidas.
*Medio de cultivo diferencial.
76Pruebas de identificación rápidasPruebas de la; catalasa, oxidasa, coagulasa y PYR
77Prueba de catalasaSirve para comprobar la presencia de la enzima catalasa en preparaciones de microorganismos.
Permite diferenciar géneros; streptococcus, bacillus, erysipelothrix
78Prueba oxidasaEs útil para diferenciar enterobacterias y pseudomona o neisserias.
La reacción positiva la indica un color azul-violeta intenso antes de 10 segundos.
79Pruebas de coagulasaEs usada específicamente para diferencias las especies del género staphylococcus.
*Los staphylococcus aureus siempre da positivo, las demás especies no.
80Medios de cultivo diferencialTSI, LIA, MIO, SIM, KIA, Citrato de Simmons, Caldo urea
81TSI (triple sugar iron)En este medio se busca determinar la capacidad de la bacteria para degradar los azúcares, la formación de gas y de H2S
82LIA (Lysine iron agar)En este medio se permite evidenciar la descarboxilación del aminoácido lisina en la diamina cadaverina, como también la desaminación de la lisina en un alfa cetoácido.
83MIO (motilidad-indol-ornitina)Este medio se usa para la identifiación de enterobacterias en base a su movilidad, producción de indol y actividad de ornitina descarboxilasa.
84SIM (sulfuro-indol-motilidad)Se utiliza para determinar la producción de sulfuro, formación de indol y movilidad de los microorganismos entéricos.
85KIAPara determinar si un microorganismo es capaz de utilizar la lactosa, produce gas o ácido sulfhídrico. Es un medio que requiere un procedimiento de inoculación especial.
86Citrato de Simmonsse usa para la diferenciación de los bacilos gramnegativos. Permite la detección de citrato sódico como fuente única de carbono y energía para las bacterias.
87Caldo Ureaes un medio diferencial para organismos, en especial los miembros de la especie Enterobacteriaceae, según su capacidad de producir ureasa. *Tinción de organismo recomendada para control de calidad del usuario.
88Colonias*Son masas visibles de células que se forman por división de una o varias células.
*El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite al microbiólogo identificar las bacterias porque las especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto característico.
*El tamaño, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo.
*La morfología de la colonia de una bacteria puede variar según el medio en que crezca la bacteria.