Método HPLC

Método HPLC

1. Mejorada de cromatografía en columna

   • Columnas que actúan bajo Gravedad
   • Alcanzan hasta 400 atmósferas
   • Columna de 150 mm x 4.6 mm, 5 micrómetros
   • Se utiliza una bomba de alta presión

2. Métodos

   • Elución Gradiente
   • Elución Isocrática

3. Métodos de detección

   • HPLC de fase normal
     • Columnas llenas de Silice
     • Disolvente no polar
     • Longitud de onda 150 a 250 nm
   • HPLC de fase inversa
     • Sílice no polar C18
     • Disolvente polar
     • Menos solubles en el solvente

4. Preparación de la muestra

   • 1er lavado 2 veces con NaCl al 10%
   • 2do lavado 3 veces con agua destilada
   • Tratarlo con ácido acético al 0.5 M
   • Se limpia con NaCl 0.9 M
   • Se disuelve en etanol
   • La solución de etanol, se mezcla con colageno

5. Condiciones Cromatográficas

   • Elección de la columna
   • Fase móvil con caudal de 1 ml/min
   • Volumen de inyección de 20 microlitros
   • Temperatura de la columna idónea
   • Longitud de onda

6. Preparación de soluciones estándar

   • Se transfieren 6.16 gr de muestra
   • Se diluye con acetonitrilo
   • Se realizan diluciones

7. Preparación de la muestra

   • Pesar 50 gr en viales
   • Extracción de muestra con metanol
   • Filtración de soluciones de Extracción
   • Inyección de alícuotas a 20 micrometros

8. Resultados

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