MORFOLOGÍA DE BACTERIAS EN CULTIVO

MORFOLOGÍA DE BACTERIAS EN CULTIVO

1. 1. CULTIVO DE LOS MICROORGANISMOS

   • Medios de Cultivo
     • Son una mezcla equilibrada de nutrientes que en concentraciones adecuadas y con condiciones físicas óptimas permiten un buen crecimiento de los microorganismos
     • Contienen una base mineral; fuente de carbono, nitrógeno y azufre; atmósfera adecuada y los factores de crecimiento necesarios.
     • Hay que tener en cuenta los nutrientes, el pH, la necesidad de gases, el suministro de luz y un control de temperatura.
     • tipos de medios de cultivos
       • Líquido o caldos
         • composición: Sintéticos (Composición química definida)
       • Sólido (posee agente solidificante (agar) a una concentración del 1,5%)
         • composición: Complejo (Composición química no definida)
       • Semisólido (Concentración de agar inferior al 0.2%)
         • Enriquecimiento
           • medio que tiene un gran exceso de nutrientes y se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
         • Selectivo o inhibitorios
           • medio que sólo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibe el de otros
         • Diferenciales
           • medio que permite revelar características fisiológicas de los microorganismos. Levine (permite visualizar la fermentación de lactosa por viraje de un indicador ácido-base
     • Preparación de medios de Cultivo
       • los medios de cultivo se preparan a partir de medios comerciales deshidratados
       • • Medios líquidos
         • Disolver los ingredientes del medio en el volumen requerido de agua destilada, agitando el recipiente con una varilla de vidrio o agitador magnético.
         • Es necesario medir el pH y en caso necesario ajustarlo con soluciones de NaOH y HCl. Tapar con algodón y papel aluminio el recipiente. Posteriormente esterilizar a 121°C durante 15 minutos en autoclave, si los componentes del mismo no son termolábiles.
         • Leer la composición química del medio de cultivo a preparar y pesar la cantidad necesaria de cada componente, según el volumen de medio a preparar.
         • Nota: los medios líquidos pueden repartirse en tubos de ensayo (5 mL en cada uno) o fraccionarlos en matraces, frascos, botellas, que puedan esterilizarse
       • • Medios sólidos
         • Los medios líquidos se convierten en sólidos al agregarle un solidificante
         • En general se usa el agar-agar.
         • La cantidad de agar (en general 2%) se mezcla en un volumen pequeño de agua y se incorpora al medio líquido. Si éste no debe subdividirse, el matraz se lleva al autoclave, donde el agar funde. Si se debe repartir en tubos, la mezcla de agar-medio debe calentarse en Baño María para homogenizarlo.
         • El agar funde a 100°C y se solidifica debajo de 45-50°C. Si se va servir el medio en cajas de Petri, los medios sólidos en matraces deben fundirse previamente, para adicionar entre 15 a 20 mL. de medio sobrefundido, evitando formar burbujas.
         • Si el medio está envasado en tubos y desea que al solidificar quede inclinado, al salir del autoclave se los deja solidificar en un ángulo de 20 o 30° sobre una varilla de vidrio (agar inclinado o en pico de flauta)
   • Esterilización
     • Se define como el proceso por el cual se eliminan todos los microorganismos incluidas las endosporas bacterianas de cualquier objeto, superficie o medio, por remoción o muerte de éstos
     • nos permite asegurar que se trabajará exclusivamente con los microorganismos deseados.
     • técnicas de esterilización
       • Métodos Físicos
       • Métodos Químicos
       • Métodos Biológicos

2. 2. SIEMBRA Y AISLAMIENTO

   • El paso de una muestra microbiana a un medio de cultivo se denomina siembra o inoculación y el paso de una muestra de un medio de cultivo a otro se denomina resiembra. Toda siembra o incluso resiembra, se puede realizar de diferentes formas de acuerdo al fin que se persiga
     • Luego de sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.
       • Siembra en medio líquido:
         • Se puede realizar con asa de siembra, pipeta o hisopo. Generalmente se realiza en tubos o en matraces.
       • Siembra en medio sólido
         • Puede ser en tubos o cajas de Petri
         • a) Siembra del inóculo en placa
           • Técnica de Barry
           • •Siembra de muestra líquida en placa con asa de Digrasky
           • Siembra por agotamiento o aislamiento en estría
           • Siembra por agotamiento o aislamiento en estría múltiple
           • Técnica de los cuatro cuadrantes
           • Técnica de los tres giros
           • Técnica de siembra por dilución
         • b) Siembra del inóculo en tubo
           • Siembra por estría en tubos con medio sólido inclinado (o pico de flauta)
           • Siembra por picadura
           • Siembra por picadura y estría
           • Siembra en tubos con medios semisólidos
   • El aislamiento consiste en obtener un solo tipo de microorganismo a partir de una población mixta. En la naturaleza, los microorganismos se encuentran asociados, por lo que se recurre a la técnica de aislamiento para separarlos.
     • Aislamiento de bacterias anaerobias
       • Para aislar microorganismos anaerobios que son rápidamente destruidos por exposición al oxígeno, las placas pueden ser preparadas en la forma usual, y luego de sembradas, incubadas en recipientes cerrados en atmósfera sin oxígeno

3. 3. IDENTIFICACIÓN

   • Caracterización de las colonias formadas en medios de cultivo sólidos
     • Tamaño
     • Color
     • Forma
     • Borde
     • Elevación
     • Luz reflejada
     • Luz transmitida
     • Consistencia
     • Superficie
     • Producción de pigmento
     • Aspecto
   • Examen microscópico de células vivas y de frotis teñido por coloración de Gram
     • COCOS
     • BACILOS
     • ESPIRALES
   • Desarrollo de pruebas bioquímicas primarias y secundarias
     • Con la aplicación y desarrollo de estas pruebas de determina el género y la especie del microorganismo en estudio