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Fichas

MICROSCOPIA

Aaron Garrido Cabello Opos C1 Español 171 fichas

Fichas del conjunto (171)

  1. 1Los microscopios ópticos tienen un límite máximo de resolución de0,2 micras (um)
  2. 2El poder de resolución es ...la distancia mínima a la que se pueden distinguir o discriminar dos puntos
    capacidad de dar imágenes bien definidas de puntos adyacentes, mostrándolos como
    diferentes y separados
  3. 3FACTORES DE LA RESOLUCION?LONG DE ONDA DE LA RESOLUCIÓN
    (inversamente proporcional)
    Angulo de apertura (lo da el medio de inmersión) o apertura numérica, que marca cual es el limite de difracción. A mas apertura numerica, mas resolucion
    espesor del especimen
    calidad de la fijación y la coloración
  4. 4Como se llaman las dos lentes del microscopio?objetivo
    ocular
  5. 5como se calcula el aumento?multiplicando la magnificación que producen
    el objetivo por la que producen los oculares
    10x 40 = 400
    algunos micrsocopios tienen oculares internos que tambien se tienen en cuenta para calcular la amplificación total
  6. 6Usando microscopios ópticos avanzados se consiguen unos1000-1500 aumentos (objetivo de 100x más oculares de 10x o 15x)
  7. 7dos características que determinan la claridad con que puede ser visto un objeto pequeño:capacidad de ampliación del instrumento, que es la relación del tamaño de la
    imagen vista con el microscopio y el tamaño real del objeto
    poder de resolución o posibilidad de observar detalles finos.
  8. 8Que es la capacidad de ampliación de un microscopio?la relación del tamaño de la
    imagen vista con el microscopio y el tamaño real del objeto.
    optico: no más de 1000
    electroconicos: 1 millón
  9. 9long de onda de la luz visible?400 a 700
  10. 10...Se denomina microscopio a todoaparato óptico o lente o sistema de lentes que interpuesto entre un objeto próximo al ojo y éste, permite observar al objeto de un tamaño mayor y percibir detalles no visibles a simple vista.
  11. 11Se considera lente asistema óptico
    transparente limitado por dos o más superficies curvas, o una curva y otra plana que tienen un
    eje común.
  12. 12En el caso de los microscopios interesan las... por que?lentes convexas
    dan imagenes aumentadas
  13. 13como son las dos imagesnes que se genera en un micrsocopioreales
    virtuales
  14. 14cuantas lentes tiene el micrsoscopio compuesto? y el simple/lupa?dos sistemas de lentes en el mismo eje:
    - lente que produce una imagen (objetivo)
    - lente que amplía esa imagen (ocular)
    simple o lupa está compuesto de una sola lente objetivo y de una sola lente
    ocular.
  15. 15Componentes de la parte mecanica de micrsocopio?pie
    platina
    tubo
    todo articulado en el asa o brazo, que sostiene al tubo que contiene la parte optica
  16. 16como es el pie/soporte del microsciopio?la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo
    general forma de Y o bien es rectangula
  17. 17que es la columna o grazo?también llamada asa
    tiene forma de C
    unida a la base por
    su parte inferior mediante una bisagra
    Sostiene el tubo en su porción superior y
    por el extremo inferior se adapta al pie
  18. 18que es el tubo?cilindro ubucado en la parte superior de la columna mediante un sistema de cremalleras, que permite el movimiento con tornillos
  19. 19que dos tornillos hay? que permiten?macrométrico: sube o baja el tubo con un mecanismod e cremallera para enfocar rapido la preparación
    micrometrico: permite ajuste fino logra el enfoque exacto y nítido. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm.
  20. 20que es la platina?es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto que se
    va a observar
    tiene un orificio en el eje optico del tubo para que pase la luz.
    Tiene también las pinzas para sujetar la muestra
    puede ser fija o giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede
    centrarse o producir movimientos circulares.
  21. 21qué es el revoler?una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos.
    Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de
    trabajo, l
  22. 22caracteristicas de cada lente?OBJETIVO: cerca de la muestra
    distancia focal muy corta
    genera imagen real, mayor e invertida
    OCULAR:: cerca del ojo
    agranda la imagen dada por el obejito
    genera imagen virtual, no invertida y aumentada
  23. 23como es la imagen obtenida respecto al objeto en un microscopio?virtual
    mayor
    invertida
  24. 24El ocular es un sistema sencillo constituido pordos lentes convexas (que actúan como una sola), en la parte superior del tubo
    de 5 a 20 aumentos
  25. 25El objetivo está formado por ... que tipos hay?varias letnes (hasta 10) que actuan como una sola
    secos
    y de inmersión
  26. 26caracteristicas de los objetivos secos? que información aportan?sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparación
    ndican el aumento que producen, la abertura numérica y otros datos
    - plan 40/0,65 y 160/0,17,
    aumento 40
    apertura numérica 0,65
    calculada para una longitud de tubo de 160 mma
  27. 27caracteristicas de los objetivos de inmesrión?complicado sistema de lentes.
    es necesario colocar una gota de aceite de cedro en contacto con la lente
    suelen ser de 100X
    uno o dos círculos o
    anillos de color negro
  28. 28como son los medios en los diferentes objetivos?aire: n=1
    inmersión: aceites de inmersión = vidrio = 1,5-1,6
  29. 29para que se usa el aceite de inmersión de cedro o un medio de n=1,5-1,5impide la desviación de los rayos más oblicuos, pudiendo así penetrar en el
    objetivo, siendo posible obtener conos luminosos más extensos, con lo que aumenta el ángulo
    de apertura y se mejora el poder resolutivo.
  30. 30Partes del sistema de imluniacon?Fuente de ilimniacon
    espejo
    diafragma
    condensador
  31. 31Cacteristicas de la fuente de iluminación del sistema de iluminación?antes era una lampara de tungsteno incandescente sobrevoltada
    ahora es un led
    delante tiene al condensador y el diafragma para controlar el diametro de la parte de preparación que queda iluminada y evitar luces parásitas
  32. 32Cacteristicas del espejo del sistema de iluminación? para que se usa cada cara?se encuentra en micrsoscopio smodernos, donde la fuente de iluminación NO esta dentro del microscopio ni alienada con el sistema optico
    2 caras: concava y plana.
    La concava se usa para iluminación artificial
    la plana para luz solar natural
  33. 33Los modelos más modernos no poseen espejos sino ..una lámpara
    que cumple la misma función que el espejo.
  34. 34acteristicas del condensador del condensadorde iluminación? que forma? donde se ubica? como son sus lentes?es un sistema de lentes que concentra los rayos sobre el plano de la preparción.
    Forma el CONO DE LUZ con el mismo angulo que el campo del objetivo
    debajo de la platina. puede deslizarse verticalmente sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo, bajándose para su uso con objetivos de poca potencia
    lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto
    con la preparación cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliación);
  35. 35Como debe ser la abertura numérica maxima del condensador?debe ser al
    menos igual que la del objetivo empleado, o no se logrará aprovechar todo su poder
    separador. E
  36. 36para que se usa el diafragma del condensador?egula su abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el
    contraste, lo que se hace cerrándolo más de lo que conviene si se quiere aprovechar la
    resolución del sistema óptico.
  37. 37como es la iluminacion de un objeto ampliadmayor sea el aumento utilizado
    más oscura se ve la imagen
    a mas apertura numérica
    mayor es el número de rayos que entran al objetivo y más luminosa es la imagen obtenida.
  38. 38que es el foco de un micrsocopio?punto donde convergen los rayos de luz y se crea la imagen
  39. 39una lente convergente da una imagen...virtual aumentada no nivertida
  40. 40Para que se usan los sisetmas de lentes?se utilizan para corregir
    aberraciones ópticas y así obtener una imagen más nítida.
  41. 41que es la apertura numérica? formula?un número adimensional que
    caracteriza el rango de ángulos para los cuales el sistema acepta luz.
    está relacionado con el ángulo de salida del sistema
    AN=n. sen θ
    siendo n el indice de refracción del medio
    y θ es la mitad del ángulo de aceptancia
    máximo que puede entrar o salir de la lente
  42. 42indice de refracción del agua pira?1,33
  43. 43Una lente con una apertura numérica grande será capaz de visualizar... mas o menos?más detalles
    ademas las lentes con aperturas numéricas grandes aceptan más luz y dan una imagen
    más brillante.
  44. 44La apertura numérica es una medida del diámetro de la apertura comparada con.. formula?la distancia focal
    LR= λC/AN
    λ= longitud de onda de la luz (en µm)
    C= constante de proporcionalidad (está relacionada con el grado de superposición de dos puntos
    para que puedan ser resueltos por el ojo humano. Esta constante suele ser de 0,50- 0,61)
    AN= apertura numérica
  45. 45Caracteristicas del examen inmediaro?material asilado
    vivo, estado fresco y tamvien con tratamiento con liquodos o colorantes vitales
  46. 46que permite ver la observación al estado fresco? que pasa si el materiale s muy espesopermite apreciar
    exactamente la morfología y los movimientos
    puede diluirse con igual volumen de solución salina fisiológica estéril
  47. 47que permite ver la observación al estado mediato al que se han añadido liquodos?los liquidos modifican las propiedades ópticas de las células. Por ejemplo una mezcla
    de alcohol-agua-glicerina, ácido acético, etc
  48. 48que permite ver la observación al estado mediato al que se han añadido colorantes vitales?estudiar las estructuras sin producir la muerte ni generar artificios de tinción (falsas
    estructuras generadas por el agregado del colorante).
  49. 49que es un colorante vital? que hace?se fija sobre los
    elementos celulares de un ser vivo sin ejercer acción nociva sobre él ni sobre sus células
    o tejidos
    no reacciona quimicamente, sino que se acumula
  50. 50caracteisticas de un colorante vital?nulo o algo toxico
    usarlo en soluciones diluidas
    soluble en agua
    rojo neutro,
    azul de metileno, azul Nilo, azul de cresilo, violeta de cresilo, violeta de metilo y verde
    jano.
  51. 51principal problema de la muestra en fresco?la falta de contraste
    el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes para identificar estructuras
  52. 52que es la fijación?coagulación del protoplasma. lo primero que se hace
    en bcaterias el calor es lo más corriente, sino el uso de formaldehidos, acidos y alcoholes
  53. 53que pasa si fijamos + colorante?no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma
  54. 54que le pasa al voumen de lac elula cuandos se fija y se tiñeencoge y se hincha respectivamente
  55. 55los colrantes cationes de carga... se unen a ...positiva
    los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos, de carga -
  56. 56colrantes cationicos?azul de metileno, el cristal violeta y la safranina.
  57. 57los colrantes anionesde carga... se unen anegtiva
    constituyentes celulares cargados
    positivamente, tales como muchas proteínas.
  58. 58colrantes anionicos?eosina, la fucsina ácida
    y el rojo Congo.
  59. 59los colorantes liposoubles se unen a...materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la
    localización de las gotículas o depósítos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro
    Sudán.
  60. 60que es un mordiente? ej?sustancia que no tiñe pero que hace que la que si tiñe actue mejor
    el ácido tánìco
    El mordiente se combina con un constituyente celular y
    lo altera de tal modo que ahora sí podrá atacar el colorante
  61. 61l azul de metileno es un buen colorante simple que actúa sobre todas lascélulas bacterianas rápidamente y que no produce un color tan
    intenso que oscurezca los detalles celulares.
    util para diagnostico de bacterias, ya que no tiñe eucariotas
  62. 62que es la tinción negativa? que material se usa¿las células se dejan sin teñir,
    pero se colorea en cambio el medio que las rodea.
    se ve el perfil de las celulas
    un material opaco sin afinidad para la celula (tinta china, que es carbono coloidal); nigrosina (negro colorante insolbule en agua)
  63. 63mejor uso de la tincion neativa además de dar contrate?revelar la presencia de cápsulas alrededor
    de las células bacterianas.
  64. 64que errores da una tinción?en ocasiones precipitados o
    agregados que parecen estructuras celulares auténticas,
    artefactos
  65. 65Pasos de preparaicon de un frotis?portaobjetiso limpio y seco, se pone una gota del material a teñir o se arrastra el isopo (se puede usar una aguja esteril para pasar cultivo al porta objetos)
    suspender el meatrial en una gota agua o solucion salina
    sie suna colonia pequeña, para que no se pierdan, se usa una varilla de madera estreil
    dejar secar en el aire o pasarlo por una llama azul hasta que este caliente pero sin quemar
  66. 66PASSOS DE LA CONFECCIÓN EN PARAFINA DE UNA MUESTRA?Fijación : conservar la morfologia y composicion de los tejidos
    Deshidratar en alcohol al concentración creciente (50-70-100) para eliminar agua
    aclarar o diafanizar en bezol, xilol o toluol, solventes del aclohol o la parafina. Se hace para embeer la pieza con una mezcla miscible con la parafina
    meterlo en parafina fundida en uan estufa de 60 grados. La prarafina penetra en el tejido y las celulas, embienedo el tejido y permitiendo el corte a microtomo
    echar la pieza en un molde rectancular que tiene la parafina y obtenemos asi un bloque de forma regular
    REHIDRATAR
    TEÑIR
  67. 67que finalidad tiene la fijación de la muestra?1 Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado in vivo.
    2. Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparación de finas películas de éste.
    3. Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos (enzimas de autolisis y degeneracion)
    4. Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren a la muerte de la célula.
  68. 68composicion de quimicos para fijación? de base aclohol? como funcionanFormaldehído al 5%
    Formol al 10%
    Formalina
    permite el uso con amortiguadores y otros fijadores
    reacciona con los grupos amino, creando enlaces transversales
    lo que mas se usa el el formol 10%
  69. 69composicion de quimicos para fijación? de base quimica?? como funcionanGlutaraldehído al 2.5%
    Tetróxido de Osmio
    Líquido de Helly : 2.5 g de bicromato de potasio, 5 g de cloruro de mercurio, 100 ml de agua y 5 ml de formol.
    Fijador de Bouin: 75 ml de solución acuosa saturada de ácido pícrico, 25 ml de formol y 5 ml de ácido acético glacial.
    todos hacen enlaces transfersales con la proteina
  70. 70reglas de oro de la fijación?el menor tiempo posible desde que muere la muestra
    l tamaño de la muestra debe de ser de 2-3 cm.
  71. 71porque se hace una secuencia ascendente de aclhol para deshidratar?con n una solución al 100% de alcohol inmediatamente, el agua saldría muy
    rápido del tejido y se deformaría.
  72. 72que es el proceso de aclaramiento o diafinización? que se usa?pasar a una solución de una sustancia que es miscible tanto con el alcohol como con el medio de inclusión a utilizar (en la mayoría de los casos se utiliza como
    medio de inclusión Parafina líquida).
    Xileno o Xilol.
    ambién se pueden utilizar Tolueno,
    Benzol o Cloroformo como medios de aclaramiento.
  73. 73porque se llama aclarmiento al aclaramiento?el tejido se torna transparente o claro en el
    xileno, esto se debe a que cambia su índice de refracción.
  74. 74que medios se suelen usar par ala inclusión de la muestras? para que se hace?gelatina y parafina
    Distinguir entre sí las células superpuestas en un tejido y la matriz extracelular
    • Tener un objeto lo suficientemente duro para su manejo y corte. EL TACO
  75. 75a que tempira se hace la parafina? cuanto dura?se coloca la muestra en un recipiente y se le agrega la parafina fundida a 60º C, colocando la muestra en una estufa de 30 minutos a 6 horas manteniendo la temperatura a 60º C.
  76. 76que pasa al aplicar calor en la inclusión?el xilol o el benzol se evaporan y los espacios anteriormente ocupados por ellos
    son ahora ocupados por la parafina
  77. 77Grosor de corte del microtomo?3-10 micras
  78. 78grasas o lípidos se extraen en el proceso de aclaramiento y las enzimas quedan inactivadas por el calentamiento de la inclusión. como las observamos?Técnica de Congelación de Tejidos. Un tejido congelado, es los suficientemente duro para ser cortado.
    se usa N liquido para congelar rapido y se usa el microtomo de congelación. Otra opción más avanzada es el criostato
  79. 79ventaja de la tecnica de la congelación de tejidos?los cortes que se obtienen son muy rápidos, se puede utilizar en el
    diagnostico rapido
  80. 80que cortes se requieren en el la M.E.? que herramienta se usa?ultrafinos
    25 a 100 nm NANOMETROS
    MICROTOMO CON HOJA DE VIDRIO O DIAMANTE
    Una vez preparados, se montan sobre
    rejillas de cobre con un diámetro de 3mm.
  81. 81Que se hace con el corte del TACO?se colocan sobre portaobjetos a los que se les ha agregado una pequeña cantidad de
    Albúmina, la cual actúa como adhesivo.
  82. 82Como se elimna la parafina antes de teñir? y la rehidrataciónse elimina en un solvente orgánico, de nuevo se incluyen en Xilol, y la muestra se
    rehidrata haciéndola pasar por una serie de graduaciones decrecientes de alcohol etílico hasta
    llegar a una solución 100% de agua.
  83. 83que se hace tras REHIDRATAR el tejido?teñir
    se suele usar HEMATOXILINA y EOSINA
  84. 84Que se hace tras teñir el objeto?deshidrata de nuevo, de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el CUBREOBJETOS con un medio adecuado para el MONTAJE (por ejemplo una
    gota de Bálsamo de Canadá o similar).
  85. 85es siempre necesiaria la deshidratación final?no
    Los medios de montaje pueden ser miscibles o no miscibles en agua, si son miscibles en agua ya no es necesaria la deshidratación después del
    teñido, se puede montarlo directamente
  86. 863 clases de colorantes?Colorantes que diferencian los componentes ácidos y básicos de la célula.
    especializados en los componentes fibrosos de la matriz
    extracelular.
    Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales con ellos.
  87. 87Caracteristicas de la EOSINA? y de la HEMATOXILINA?Acido
    su tinción se basa ne las anilinas ácidas.
    no es un colorante básico, posee propiedades muy semejantes a las anilinas básicas. Se usa con mordientes
  88. 88Qué es un colorante básico?una molécula de anilina que tiene una o más cargas positivas en su
    porción coloreadas
  89. 89que son las anilinas? con que reaccionanSon colorantes básicos que reaccionan con
    -los grupos anionicos (grupos fosfatos del material genetico),
    - grupos sulfatos de los glucosaminoglucanos
    - grupos carboxilos de las proteina
  90. 90Los colorantes básicos verdaderos no suelen usarse en secuencia en donde el colorante básico es seguido por uno ácido, por que...la anlinia basica se disocia del tejido en los lavados posterioers en solucion acuosa
  91. 91a que se unen los colorantes acidos?por medio de enlaces
    electrostáticos
    reaccionan con grupos catiónicos, como los GRUPOS AMINO IONIZADOS de las proteínas.
  92. 92que componentes son basofilos(que se unen a colorantes basicos-hematoxilina?)La Heterocromatina y los Nucleolos del Núcleo por los grupos Fosfato ionizados.
    • Ergatoplasma (parte del citoplasma) por grupos Fosfato ionizados.
    • Matriz del Cartílago por grupos Sulfato ionizados.
  93. 93que componentes son acidófilos(que se unen a colorantes acidos?)La mayor parte del citoplasma no especializado.
    • Filamentos Citoplasmáticos.
    • Fibras extracelulares.
    esto es por los grupos aminos ionizados
  94. 94como podemos regular la claridad de lamuestra?No utilizar el diafragma para reducir la
    claridad; para ello disminuir la intensidad de la lámpara o interponer filtros.
  95. 95Caracteristica del microscopio invertido? que permite?el revolver esta debajo de la platina
    la luz, que pasa por condensador y diafragma, llega por encima de la platina.
    se usa para estudiar monocapas celulares cuando se trabaja con botellas o tubos de cultivo.
    permite observar organismos o tejidos en cultivo sin una prepaación previa, favoreciendo el seguimiento del estado de crecimiento, comportamiento y demás parámetros involucrados en el desarrollo del cultivo.
  96. 96limitación del M. invertido?su limitado aumento, debido a que los objetivos más
    potentes son de 40X y de 60X
  97. 97El micrsocopio de campo claro es el que hay comúnmente en los laboratorios que necesita?muestra fina
    utilizar métodos de tinción para dar contraste
  98. 98para que sirve el M de contraste de fases? En que se basa?observar células sin colorear y resulta especialmente útil para células vivas y cortes semifinios sin color
    las pequeñas diferencias de los índices de refracción en las distintas partes de una célula y en distintas partes de una muestra de tejido
  99. 99Como trabaja la luz el M de contrastte de fase? como se ve cada cosa?La luz que pasa por regiones de mas indice de refracción se deflexan y quedan fuera de fase respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra.
    el condensador, anula la amplitud de la porción fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste útil
    sobre la imagen
    las partes densas se ven oscuras
    las partes claras son las menos densas
  100. 100como funciona el microscopio NORMASKTI o de contraste de de fase con interferencia (DIC) que es ideal ver en el ?Usa transiluminación
    permite saber la densidad optica de la muestra y ver detalles
    se ve como el contraste de fase pero sin ver halos de difracción
    especímenes no coloreados y transparentes muy difíciles de manejar, (ej: fecundaciones in vitro)
  101. 101que tipo de liuz usa el microscopio NORMASKTI o de contraste de de fase con interferencia (DIC)Emplea luz polarizada la cual pasa por dos prismas birrefringentes (Nomarski, Wollaston) que la fraccionan
    en dos rayos cuyos trayectos e índices de refracción son diferentes, dando como resultado una imagen del espécimen en 3D o relieves que corresponden a las variaciones de la densidad óptica de la muestra con énfasis en líneas y bordes, como si la célula proyectara sombras hacia un lado
  102. 102Como funciona el microscopio de campo oscuro? como se ven las cosas?utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen
    El objeto iluminado dispersa la luz y se hace así visible contra el fondo oscuro que tiene detrás, como las partículas de polvo
    lo transparente queda oscuro
    las superfiices y particulas se ven brillantes por la luz recibida y dispersada
  103. 103que uso tiene le microscopio de campo oscuro?elementos biológicos transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminación normal, sin fijar la
    muestra, es decir, sin matarla.
    tambien para metales de alta reflactancia
  104. 104que equipo especial tiene el M de campo socuro?condensador especial que ilumina la
    muestra con luz fuerte indirecta.
    el campo visual se observa detrás de la
    muestra como un fondo oscuro sobre el cual aparecen pequeñas partículas brillantes de la muestra que reflejan parte de la luz hacia el objetivo
  105. 105que tipos de condensadores se usan en el M. Campo oscuro?dos tipos:
    tipoparaboloide (tiene una superficie espejada),
    tipo cardioide, con dos superficies
    espejadas
    uso indistinto, mientras que la luz no incida directamente en el objetivo, sino que incide con una
    apertura numérica mayor al del objetivo.
  106. 106Caracteristicas del M. Fluorescencia? que filtro necesita?usa la UV
    la muestra se ilumina por rayos de x long de onda y se observa la radiación EM que emiten, de mayor long de onda
    fILTROS ESPECIALES para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador y
    encima del objetivo.
    retienen la radiación ultra-violeta, que es peligrosa para el ojo humano, dejando pasar solamente la
    radiación visible, que no es peligrosa
  107. 107que tipos de muesstra se ven en el M. FLUORECENCIA?detectar sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o
    sustancias marcadas con fluorocromos artificiales o neurotransmosires
  108. 108que es un fluorocromo?molecula que puede excitarse al absorber UV y luego regresan a su estado fundamental, emitiendo radiacón de mayor long de onda
    vamos, que es fluorescente
  109. 109Como son las lentes de M.FLUORESCENCIA?cuarzo ya que el vidrio absorbe
    la radiación ultra-violeta.
  110. 110que es la epifluorescenciaHoy día se utiliza mucho un microscopio de fluorescencia en el cual la luz es emitida desde arriba del preparado (epifluorescencia), se denomina también microscopio de luz fluorescente
    incidente.
  111. 111ventajs del M. de FLUORESCNECIA?Sirve para observar muestras con poco procesamiento, NO requiere el uso
    de microtomos ni ultramicrotomos, ni requiere recubrimiento del material,
    lo que es imprescindible es que la muestra posea fluorocromos naturales o artificiales
  112. 112que es un fluorocromo y un fluoroforo?• Fluorocromo: Marcador colorante fluorescente empleado en investigación para crear contraste
    en zonas determinadas de los especímenes.
    • Fluoróforo: Parte de una molécula (fluorocromo, proteína) que presenta la propiedad de tener fluorescencia.
  113. 113long de odna de la UV? que resolucion puede alcanzar?200 nm
    100 nm.
    permite mejorar
    el detalle absorbiendo selectivamente distintas longitudes de onda de la banda ultravioleta.
  114. 114Base del M de UV? que se puede ver?La microscopia ultravioleta no es muy
    diferente del funcionamiento de un espectrofotómetro pero sus resultados son registrados en
    fotografías
    ADN, proteinas con ciertos aa
    cuantificación de material genetico con long de onda especifica
    Ccomo la radiación ultravioleta es invisible, la imagen se muestra con
    fosforescencia, en fotos o con escaner electronicos
  115. 115Puede observarse directamente un M. de UV?NO
    daña los ojos
  116. 116material opitco del M de UV?Dado que el vidrio no transmite las longitudes de onda más cortas de la luz ultravioleta, los elementos
    ópticos de estos microscopios están hechos con cuarzo, fluorita o sistemas de espejos aluminizados.
  117. 117La fuente luminosa de UV?a lámparas de arco de mercurio o xenón.
  118. 118Bases de la micrsocopia de polarización?se les han añadido dos
    polarizadores de cuarzo y nicol (uno entre el condensador y la muestra y el otro entre la muestra y el observador).
    solo deja pasar luz que vibra en un solo plano.
    según que los dos nicoles estén paralelos o cruzados la luz del campo del microsocpio será clara u oscura
  119. 119que compuestos se ven con el M de polariación?Algunos compuestos inorgánicos responden al efecto de la luz, éstos tienen un alto grado de
    orientación molecular (sustancias anisótropas),
    efectiva en el estudio de muestras ricas en materiales birrefringentes. Mejor imagen de todas
    y es ideal para observar y fotografiar aquellos elementos que son visibles gracias a la anisotropía, de allí su
    uso en cristalografía y estrucutras celulare sbirrifirgentes (musculos estraidos, esqueleticos, cristaloides intracelulares)
  120. 120que es la birrifrigencia?Al fenómeno de
    extinción de luz causado por estos planos atómicos y orientaciones moleculares
  121. 121que tipos de luces puede usar la M de Polarización?luz transmitida
    luz incidente
    (transiluminación y epi-iluminación, respectivamente).
  122. 122en la M. luz polarizada, como se llaman los filtrso?un filtro polarizante llamado
    polarizador entre la fuente de luz y la muestra
    segundo polarizador, denominado
    analizador entre el objetivo y el observado
  123. 123que se usa en la M.E?electrones acelerados con λ asociada bastante menor de 1 Å
  124. 124Resolución dela ME?resolución atómica
  125. 125Como se generan los electrones del ME?por efecto termo-iónico en un filamento (cátodo) que es generalmente wolframio, y se monocromatizan acelerándolos a través de un potencial (E) en un
    sistema sometido a vacío.
  126. 126la interacción entre los electrones y la materia es XXXXXX que no se cumple le teoría cinemática (fenómenos de difracción múltiples) y, por tanto, inxxxxxxxxxxx de electrones es muy complicado.Muy fuerte
    terpretar las intensidades de
    la difracción
  127. 127Componetnes de un M. electronico?cañón
    que emite los electrones
    lentes magnéticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones (las lentes normales no sirven)
    sistema de vacio (el aire desvia el electron)
    un sistema que registra o muestra la imagen que producen los electrones.
  128. 128como se trata las preparaciones para el ME?con colorantes especiales de la microscopia
    electrónica, tales como ácido ósmico, permanganato, uranio, lantano o plomo
    son atomos de alto peso molecular y dispersan bien los elecctrones y presentan un contraste muy aumentado
  129. 129se usa la Tinción negativa en el ME?SI
    la mas habitaul es con ácido fosfowolfrámico
    (fosfotúngstico) un compuesto de W, un metal pesado, que preserva la información estructural del espécimen o muestra a visualizar en el estudio
  130. 130como se examinan las superfices celulares del ME?pueden prepararse réplicas de carbono evaporando sobre la superficie de las células una fina capa de carbono que se adapta a los contornos de la superficie celular y que cuando es
    desprendida resulta suficientemente delgada para poder observarse directamente al microscopio
    electrónico.
  131. 131Que es la criocorrosiion en la ME?Tecnica evita la formación de artefactos al eliminar la fijación química y la inclusión
    la muestra se congela y se corta con diamante, quitando las porciones de las superficies de las células.
    luego se les hace replicas de carbno de esas superifices pudiéndose observar
    estructuras superficiales o internas de las células. L
  132. 132Tipos de M.E?Transmisión
    Barrido
    Barrido ++ transmisión
    Microanalizado de sonda de electreones
  133. 133funcionamiento del TEM(Transmisión=dirige el haz de electrones hacia
    el objeto que desea aumentar y examina una gran parte de la muestra cada vez
    Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espécimen.
    Pueden
    aumentar la imagen de un objeto hasta un millón de veces.
  134. 134Funcionamiento del SEM (Barrido)crea una imagen
    ampliada de la superficie de un objeto.
    no hay que cortar el objeto, puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos.
    explora la superficie de la imagen punto por punto, barriendo la muestra con un haz de electrones muy concentrado
    amplia 20000 veces
  135. 135siempre hay que cortar la muestra en la EM?NO, La SEM no hace falta
    pero son TEM si, hay que ser ultrafino ya que el electron debe atravesar la meustra
  136. 136que ME produce imagenes 3d?el SEM (Barrido)
  137. 137ampliaciaón de SEM? y TEM?200.000 y en 3D
    1 millon o más
  138. 138Capacidad del microscopio electrónico de barrido y transmisión (STEM Scanning Transmisión Electron Microscope)combina los elementos de un SEM y un TEM, y puede mostrar los
    átomos individuales de un objeto.
  139. 139Como funciona el microanalizador de sonda de electrones?es un ME con un analizador de espectro de rayos X.
    Analiza los Rayos X de la muestra al ser bormbardeado con eletctonres
    Dado que la identidad
    de los diferentes átomos y moléculas de un material se puede conocer utilizando sus emisiones de rayos X, se genera una imagen ampliada y adeas da ifnromación de la composicion quimica
  140. 140Componntes del TEM?filamento de tungsteno calentado que emite electrones (cátodo)
    Anodo para atraer los electrones
    diferencia de alto voltaje entre anodo y catodo para acellar los electrones y crear el haz
    electroimanes para dirigir los e
    Lentes condensadoras forma el haz y modifica el diámetro del haz que incide en el plano del espécimen.
  141. 141Donde se ven la imagen del TEM¿la imagen final se visualiza sobre una planilla cubierta con fósforo.
    una placa fotográfica o un detector de vídeo por encima o
    por debajo de la pantalla del visor
  142. 142Como se ve la muestra del TEMpLo que atraviesa los e aparecen brillantes
    la muestra que absorbe o rebota e por su densidad o por el recubrimiento de metal pesado, aparece osucro
  143. 143Como se prepara la muestra para TEM?fijación con glutaraldehido,
    lavado con un tampón o buffer
    fijación con tetróxido de osmio a las membranas (componetnes fosfolipidocs)
    Deshidratación ( A menudo, se agrega nitrato de uranilo)
    (enl afijación o deshidratación se añaden los iones de metales)
    cortar con ultramicrotomo. se les hace flotar en liquido y se colocan en rejillas de malla de cobre recubiertas por plástico. Estas rejillas tienen 50-400 orificios por pulgada o hendiduras especiales para observar cortes
    seriados.
  144. 144Cuantas magnitudes es mas fino el MO que el ME?magnitud 3-4 órdenes menores o más finos que los utilizados para el
    microscopio óptico.
    n para el TEM piezas de tejidos no mayores de 1 mm3. y de grosor 50 nm y 150 nm.
  145. 145Como se hace la inmersisón secuencial en el TEM? QUE DOS QUIMICOS SE USAN?La inmersión secuencial en soluciones de acetato de uranilo y citrato de plomo se usa rutinariamente para teñir los cortes antes de observar
  146. 146Hay que fijar sirmpe el material ene l TEM'NO
    En congelación-fractura puede no estarlo
    si está fijado, se elimina el fijador del tejido por medio de
    lavados, antes de procesar
  147. 147como se procesal amuestra del TEM para congelación-fractura?Se infiltra el tejido con un crioprotector, como el glicerol y se
    congela rápidamente a unos – 160ºC
  148. 148Uso principal del SEM? EN QUE SE BASA?análisis de superficies de muestras
    características microscópicas de la
    muestra
    la amplificación electrónica de señales generadas al irradiar la superficie de la muestra con
    un haz muy estrecho de electrones.
  149. 149Con que se recubre la muestra en el SEMPuna capa de carbón o una capa delgada de un metal como el oro para darle propiedades conductoras a la
    muestra
    ha de ser suficientemente grueso como para que circule la corriente eléctrica que se deposita en la muestra y suficientemente delgado para que no tape la muestra
  150. 150En el SEM, un detector mide...electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de
    muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de
    TV o una imagen digital. Su resolución está entre 4 y 20 nm, dependiendo del microscopio
  151. 151procesamiento de la muestra para SEM?la muestra tiene que estar seca y ser conductora de la corriente eléctrica (se da en metales pero eno en todas las muestras bioloficas)
    para hacer a la muestra conductora, se la recubre de una capa
    de algún material conductor tal como el carbón o el oro.
  152. 152que pasa con los elcetrones del SEM?rebotan
    chocan y ceden su energia a otros electrones que se libran (e secundarios)
    producri rayos X, electrones auger, etc
    lo que se suele detectar son los E secundarios, que proporciona una imagen de la morfología superficial
  153. 153en el SEM, al ver rayos x, que obtenemos?la señal de rayos X proporciona espectros e imágenes acerca de la composición de elementos
    químicos en la muestra.
  154. 154Commponentes del SEM?Un cañón de electrones con un filamento que actúa como emisor de E
    lentes electromagnéticas encargado de focalizar y reducir a un diámetro
    muy pequeño el haz de electrones
    sistema de barrido que hace recorrer el haz de electrones ya focalizado
    Uno o varios sistemas de detección que permiten captar el resultado de la interacción y pasarlo a señal electrica
    Una salida conectada a una o varias bombas que producen el vacío necesario
  155. 155por que usamos los E secundarios en la SEM?Debido a la baja energía de los electrones secundarios, en su viaje hacia el exterior de la muestra, van perdiendo energía por diferentes interacciones, de forma que sólo los que están muy
    próximos a la superficie tienen alguna probabilidad de escapar del material y llegar al detector. Por tanto, la señal de secundarios procede de la misma superficie y de una pequeñísima zona por
    debajo de ella, en torno a unos pocos nanómetros.
  156. 156vENTAJA DE SEM?la mayor parte de la muestras se pueden examinar sin apenas preparación. No obstante, en algunos
    casos, sobre todo en material biológico, la preparación es algo más complicada
  157. 157Como se ahce el recubrimiento con oro en la SEM? el sputtering=necesario para eliminar o reducir la carga eléctrica que se crea rápidamente
    en la superficie de una muestra no conductora cuando se barre con un haz de electrones de alta energía.
    es una fuente de alimentación en corriente continua de 1-3 KV conectada por una parte a una tarjeta de oro o paladio, y por otro lado, a la muestra.
    todo en una bomva de vacio
    se mete gas argon al vacio y los atomos impactan con el oro y desprendan aotmos de oro que van a la mesutra
  158. 158Como se ahce el recubrimiento con carbon?dos electrodos conectados a una fuente de corriente alterna de bajo voltaje y alta
    intensidad entre los que se intercala una barra de carbono terminada en punta afilada.
    Pasa por la corriente y la punta de la barra se va evaporando, de forma que rocía la muestra
    un muelle mantiene en todo momento en
    contacto con el otro electrodo
    todo en el vacio
  159. 159problema de cubrir con oro en el SEM?imposibilita, en la mayoría de los casos, la obtención de
    un espectro de rayos X de elementos, ya que absorbe la mayoría de los
    rayos X procedentes de la propia muestra, que intentan emerger a través de la superficie.
    el carbono es más trasnparente a los rayos X
  160. 160que aporta la micrsocopia confocalmás delgado sea, más nítida será la imagen; pero con este método se pierde la información tridimensional durante el corte.
    Si una muestra gruesa es observada al microscopio fotónico, la imagen que se enfoca se ve contaminada por la superposición de los elementos del
    tejido que están fuera de foco, tanto por encima como por debajo del plano enfocado; la imagen enfocada se deteriora a causa de las estructuras superpuestas borrosas o no enfocadas.
    Esto lo ARREGLA
  161. 161que aporta la confocal? LA DE ORDENADORpermite realizar cortes ópticos finos a muestras de tejidos más o menos gruesos y realizar
    reconstrucciones en tres dimensiones a partir de cortes seriados
    permite tener imágenes de la
    arquitectura tridimensional de células y tejidos.
  162. 162Como se ve la imagen de la confocal?permite enfocar únicamente un plano , un corte otpico
    determinado del espécimen, eliminando la luz (fluorescencia) procedente de las regiones que no
    están en el plano de enfoque.
    si no se usa, auqnue se enfoque, se ve borroso, porque no puede enfocar en 3D
  163. 163que ventaja tiene la confocal?la alta calidad de las
    imágenes que proporciona a partir de especímenes preparados
    Uso de la fluorescencia (epi-fluorescencia).
    Enfoca un solo plano del espécimen.
    o Elimina la información proveniente de otros planos no enfocados del espécimen.
    Obtención de cortes ópticos seriados a partir de muestras con cierto grosor o cuyo corte fino se dificulta.
    Gracias a programas de computación, se combinan los cortes ópticos seriados y a partir de ellos se reconstruye en tres dimensiones la estructura observada.
  164. 164Cual es el principio dela confocal? que necesitailuminar el espécimen punto por punto y elimina la
    luz proveniente de los planos no enfocados.
    necesita una fuente de luz muy potente,
    un filtro con un agujero (pinhole) que se coloca en el trayecto del rayo de luz
  165. 165que luz usa la confocal?Minsky lo logró con una lámpara de arco de zirconio, pero en los microscopios modernos se
    emplea un rayo laser, cuya longitud de onda puede estar disponible en un amplio rango de
    frecuencias.
  166. 166Componentes de la microscopia confocal?fuente de luz: laser multifrecuencia (UV-IR segun el marcador que se necesite) o lamapra de arco
    sistema optico: como los de MO pero complemetnados con la optica moderna y la tecnologia electronica
    filtros de interferencia: espejos dicromáticos o dicroicos, barreras con agujero de diámetro variable y diversos filtros de excitación (para seleccionar la longitud de onda
    • Detectores: Son fotodetectores muy sensibles a la fluorescencia emitida
    Computadora
  167. 167en la confocal que es la tencia de escaneo con un solo rayo (laser) y el escaneo con múltiples rayos.La primera es la
    popular y emplea un par de
    espejos controlados por computadora para escanear el espécimen.
    La técnica multi-rayos utiliza
    una lámpara de arco y el escaneo se realiza gracias a un disco rotatorio (disco de Nipkow) conformado por micro-lentes y micro-agujeros. Esta última técnica de iluminación disminuye el
    daño a los especímenes e incrementa la detección.
  168. 168grosor de las imagenes de confocal?rango de 0.5
    1.5 micrómetros
    Se pueden obtener de una manera no invasiva a partir de especímenes
    fluorescentes cuyo espesor puede variar entre 50-100 micrómetros.
  169. 169La epi-iluminación es y se emplea:luz que incide desde arriba o lateral empleada en microscopía de fluorescencia
  170. 170lo que le hace el pinhole en cofoncal a la luz esdiscriminar segun las coordenadas
  171. 171La secuencia correcta para la preparación de cortes en microscopía es :c) fijación-deshidratación-aclaramiento-inclusión-corte

Información

Descripción
C1 Opos Fichas sobre MICROSCOPIA, creado por Aaron Garrido Cabello el 18/03/2026.
Creado por
Aaron Garrido Cabello · mar 2026
Actualizado
19 mar 2026
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