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Fichas

CITOMETRIA DE FLUJO

Aaron Garrido Cabello Opos C1 Español 44 fichas

Fichas del conjunto (44)

  1. 1La citometría de flujo es una técnicacuantitativa y cualitativa de análisis y separación de partículas
    (células, bacterias, cromosomas, orgánulos, etc.),
  2. 2El fundamento de la citometría de flujo consiste enhacer pasar una suspensión de partículas (generalmente células) alineadas y de una en una por delante de un haz de láser focalizado y medir la
    luz emitida por cada una de las células a medida que lo atraviesan
  3. 3Como pueden estar las celulas de la citometria¿pueden estar vivas o
    fijadas pero, siempre en suspensión celular y en forma de célula única
  4. 4la celula puede emitr fluorescncia?si
    si
    esa célula tiene alguna sonda fluorescente o fluorocromo, emitirá fluorescencia al ser excitada por el
    láser
  5. 5que mide o que info nos da el laser? que indica cada cosa?dispersión de luz (indicador del tamaño, forma y estructura de la partícula)
    si las particulas han sido teñidas, el laser las exicita y da info sobre la actividad metabolica, contenido de ADN o marcadores intracelulares o de supserifice
  6. 6Sensibilidad de la citometria?superior a 1.10-4, es decir, es capaz de detectar una célula tumoral
    entre 10000 células normales.
  7. 7Desventajas de la citometria?incapacidad para
    diferenciar las células normales de los blastos leucémicos en muestras de pocas celulas
    limita el estudio fenotipico de tejidos debido al tratamiento de disgregación celular, ya que altera la arquitetcuta de los tejidosc elulares
  8. 8que parametros se miden en la citometria?Dispersión frontal de la luz a 2º (forward scatter), valor proporcional al tamaño celular.
    Dispersión de la luz ortogonal (side scatter), proporcional a la cantidad de estructuras granulares o
    complejidad de la célula.
    . Intensidades de fluorescencia a diferentes longitudes de onda.
  9. 9Sismtemas del citometro?sistemas fluídicos
    ópticos
    detectores
    electrónicos
    onvertidores analógico-digitales y ordenadores.
  10. 10que permtie el sistema de flujidos?enfoque hidrodinámico del flujo celular hasta conseguir el alineamiento
    de las partículas o células con el láser
  11. 11que cuantifica el sistema electronico?los destellos de fluorescencia y de la luz
    dispersada transformándo esas señales de fluoresciencia en datos electrónicos para el ordenadro
  12. 12que estadisticos sacamos?varios datos estadísticos de las muestras
    analizadas entre ellos: media, mediana y coeficiente de variación.
  13. 13que ocurre en el CELL SORTERS?se produce una
    rotura del flujo en gotas de tamaño uniforme para conseguir la separación de células individuales.
  14. 14Los sistemas ópticos permiten el enfoque láser en un haz con un diámetro reducido parampactar
    sobre el menor número de partículas posibles simultáneamente.
  15. 15El sistema optico tiene dos tipos de opticas: cuales?optica de excitación: es el laser y las lsntes para enfocar y dirigir el haz de luz
    optica de lectura: lentes de recolección de luz emitida tras la interacción conl as particulas, y un sistemas de epsejos y filtros para dirigir lasl ong de donas especificas a cada reeceptor
  16. 16Los FILTROS OPTICOS son aquellos que seleccionan las longitudes de onda que deja pasar hacia el detector. Estos pueden ser:Interferencia: dicroicos que reflejan la long de onda no deseada
    Absorción: absoren la lung de onda no deseada. Hay 3 tipos
    - BAND PASS
    - SOHRT PASS
    - LONG PASS
  17. 17Como interactuan con las long de ondas los diferentes filtros optico sde absorcióN'- BAND PASS: Dejan pasar un rango de longitudes de onda
    - SOHRT PAS: Dejan pasar por debajo de una longitud de onda determinada
    - LONG PASS: Dejan pasar por encima de una longitud de onda determinada
  18. 18Como separa el citometro de flujo?El sistema electrónico se encarga de la cuantificación de los destellos de fluorescencia y de la luz
    dispersada y, bajo el control del ordenador, se consigue la carga electrónica de las gotas que contienen
    las células de interés para poder someterlas a deflección y recogerlas en tubos específicos para tal fin,
    o sobre pocillos de cultivo de tejidos
  19. 19que datos da el citometro de flujo?– El tamaño celular relativo (Forward Scatter o FSC) , con agunos de dispersión de menos de 10 grados
    – La complejidad interna o granularidad relativa (Side Scatter o SSC)
    – Intensidades relativas de emisión de fluorescencia (Side fluorescence SFL1, SFL2, SFL3, etc..).
  20. 20Como se llama el gráfico del citometro de flujo?diagrama de dispersión.
  21. 21detalles soer la señal de fluorecencia que capta el citometro?vienen de complejos antigeno-anticuerpo, marcados con fluorocromo
    señal de fluorescencia emitida igual a la proporción de la cantidad de componentes fluorescentes de la
    partícula
  22. 22que es la dispersión que se da en el citomero?n cambio de dirección
    (no de la longitud de onda) tras interactuar con la celula
  23. 23que factores celulares afectan a la dispersión de la luz?tamaño celular
    la membrana
    el núcleo
    el material granular del interior de la célula, llamado complejida
  24. 24que información se pierde con el citrometro de flujo?Debido a la necesidad de utilizar una suspensión de partículas (células, núcleos, cromosomas, etc), para
    ser leídos de una en una hace que se pierda información sobre la arquitectura de los tejidos que
    componen las células o de las propias células, así como la ineracción entre estas y el medio que las
    rodea (patrones nodulares o difusos de los linfomas).
  25. 25ventajas del citometro de flujo¿analisis rapido 5000 particulas por segundo
    cuantificaión usando los canales medios de fluorescencia
    muy sensible y objetivo
    caracteizar poblaciones celulares poco abundandte
    analisisde poblaciones y epitopos celulares
    cuantificar las moléculas antigénicas presentes en un grupo celular
  26. 265 partamtros que vemos con el citometro?amaño, complejidad, contenido de ADN, viabilidad celular y presencia o ausencia de
    antígenos
  27. 27que anticoagulantes se susa en el citometro?DTA en vez de heparina sódica, debido al uso previo del contador hematológico
    y para no alterar la conformación de los antígenos a estudiar
  28. 28Para la determinación de antígenos de activación plaquetaria y de los productos de leucoféresis, se recomienda usar qué quimicos?ácido citrato dextrosa
    (ACD) y fosfato citrato dextrosa (CPD), respectivamente
  29. 29para contar celulas que vienen de tejidos solidos, cómo debe estar el anticoagulante?diluido en un volumen de hasta 1 mL de un líquido isotónico estéril (suero salino
    fisiológico o tampón fosfato con pH 7,4) filtrado por filtros con poro < 0,40 µm.
  30. 30Para muestras de menos de 1 mL, el, el volumen del líquido
    isotónico en el que se diluye el espécimen no debe superar el volumen de la muestra obtenida para
    evitar una dilución excesiva.
  31. 31como debe ser la meustra que se pas al ciotmerto? se la trata?no se recomienda el empleo de medios de cultivo
    las que vienen de biopsia o procedimientos quirúrgicos, no deben ser sometidos a procesos de
    fijación o congelación.
    lo ideal es que tenga el menor procesamiento posible ey lo más fresco psoible
  32. 32Para el estudio del LCR y de las plaquetas, el tiempo de conservación es aún menor, xxxhoras desde su obtención,4 horas
  33. 33a que T se conservan las celuulas del citometro22-25
    en caso de alamcenamiento y transporte prolongado, se usa 4-6 grados y un reacivo establizador para aguantar hasta 5 dias
  34. 34como se aplica un fluorocromo a las celulas?Se emplearán además, fluorocromos directa o indirectamente conjugados a los AcMo. Entre los
    principales fluorocromos se encuentran: FITC, RPE, ECD, PC5, PC5.5, PerCP, APC y AP7.
    Las
    muestran se incubarán durante 20 a 30 min a temperatura ambiente.
  35. 35que tratamiento hace falta para poder ver antigenos intracitoplasmáticos e intranucelares?previa
    permeabilización de la membrana celular, a través de reactivos como: BD Cytofix/ CytopermTM y
    LeucopermTM, respectivamente
  36. 36Protocolo para lisar hematies?solución lisante o cloruro de amonio, durante 10 min
    a temperatura ambiente
    lavar 2 veces con suero fisiologico
    centrifugar 4 grados 10 min a 1500 rpm
    en caso de tener que conservar y fijar la muestra, usar para conservar su viabilidad con una solución fijadora (formaldehido al 1 %) y guardadas a 4oC
  37. 37que actividades se hacen para comprobar qeu el citometro va bien?: verificar la alineación óptica diaria
    estandarización y la compensación de la superposición espectral.
  38. 38Los controles del citometro corrigen...la
    superposición espectral de un fluorocromo en el espectro de fluorescencia de otro fluorocromo.
  39. 39Como se calibra el citometro?utilizando AcMo conjugados a diferentes fluorocromos de manera independiente y la inclusión de un tubo extra sin marcaje, que constituirá el control negativo.
    Se aconseja emplear los AcMo dirigidos contra los
    antígenos expresados en la mayoría de los linfocitos T y B como son anti-CD3 y anti-CD19,
    respectivamente.
  40. 40rango de la particula para usarla en el citometro?e entre 0,5 y 40 µm de diámetro.
  41. 41como usar el citometro par amedir cancer?El citómetro es capaz de cuantificar el grado de proliferación celular, es decir la tasa con que
    las células se multiplican
    determinar el contenido exacto de ADN de cada especie
  42. 42En el citometro se pueden medir miles de parámetros por celda para genera"huellas
    digitales" únicas.
  43. 43Cuántas ópticas hay en un sistema de citometría de flujo:c) 2, el de excitación y el de lectura
  44. 4413. Si empleo un sistema de detección fluorescente para ADN uso el modo:SFL

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Descripción
C1 Opos Fichas sobre CITOMETRIA DE FLUJO, creado por Aaron Garrido Cabello el 20/03/2026.
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