Diagrama de flujo
FOTOCOLORIMETRÍA Y CURVA DE CALIBRACIÓN
Contenido del diagrama
La fotocolorimetría
método para hallar concentraciones de diferentes muestras y para seguir
el curso de una reacción en experimentos de cinética química o enzimática.
Consiste en medir la
intensidad de luz absorbida (A) por una solución coloreada de uno o varios compuestos.
La absorción máxima ocurre a una longitud de onda, varía proporcionalmente con la concentración del compuesto
en una solución.
Absorción de energía por sustancias coloreadas
El espectro electromagnético abarca diferentes longitudes de onda, que van desde las ondas de radio hasta rayos gamma.
Se sabe que a menor longitud de onda , mayor frecuencia y por tanto mayor energía.
Dependiendo de la frecuencia (energía) de la región
del espectro, se afecta a las moléculas de diferentes formas.
Una sustancia es coloreada porque absorbe
y transmite radiación electromagnética.
El color que se observa es una combinación de las longitudes de onda no
absorbidas, y por lo tanto, transmitidas por la sustancia.
Espectro de absorción
Para saber la energía de las transiciones en una molécula cuando se irradia con luz U.V. o visible, es necesario trazar una gráfica.
Donde se relacione la intensidad de
energía que se va absorbiendo en la región del espectro que nos interesa
Se llama espectro de absorción, y se puede deducir la longitud de onda en la cual el compuesto absorbe con mayor intensidad la energía.
El conocimiento de la precisión la energía de la transición de máxima absorción facilita la detección de la sustancia.
Facilitar la detección de la sustancia
permite determinar su concentración o para seguirle la huella en experimentos de tipo cinético.
Energía absorbida y concentración (ley de Beer)
La intensidad de la energía absorbida depende del número de moléculas que sufren la
transición electrónica a la onda seleccionada.
calcula la concentración de una muestra problema, midiendo la absorbancia de la muestra patrón (Apat.) y de la muestra problema (Aprob.).
Depende a su vez de la concentración
de la especie y de la longitud de la celda que la contiene:
Tanto a las soluciones patrón como a las muestras problema se les mide la absorbancia; con los datos de las
soluciones patrón se construye la curva de calibración (A vs. C).
Las absorbancias de las muestras problema
por interpolación de la curva, permiten calcular las concentraciones.
Cuantificación de proteínas
Se puede dar por los patrones de absorción de las radiaciones electromagnéticas de los
grupos aromáticos.
También se puede dar por la reactividad del enlace peptídico, su contenido de nitrógeno, entre otras.
En la reacción de Biuret las sustancias que contengan dos o más enlaces peptídicos, interaccionan con sales de cobre en soluciones alcalinas, formando un complejo púrpura-violeta.
Espectrofotómetros
permiten determinar la absorbancia de la luz en numerosas sustancias orgánicas.
equipos diseñados para medir directamente la intensidad de luz que es absorbida y/o transmitida por un
compuesto en una solución.
Información
- Descripción
- FOTOCOLORIMETRÍA Y CURVA DE CALIBRACIÓN
- Creado por
- MANUELA VASQUEZ MARTINEZ · ago 2021
- Actualizado
- 25 oct 2022
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