MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN

MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN

1. CELULAR

   • Fragmentación Celular
     • Obtención de un determinado componente celular mediante un conjunto de diversos métodos y técnicas Se puede observar: orgánulos, fracciónes de membrana, complejos multiproteicos (citoesqueleto de actina, microtúbulos, poros nucleares, etc.) * Método más común de separación
       • Centrifugación Diferencial
         • Diferencial de densidad entre la partícula a sedimentar y la densidad del medio en el que se encuentra Sedimentación - Es el transporte de partículas en un campo de fuerza de centrifugación
           • Centrifugación zonal
             • la muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente de densidades previamente formado
               • Ultracentrifugación

2. BACTERIANA

   • Métodos fenotípicos
     • Los esquemas tradicionales de identificación fenotípica bacteriana se basan en las características «observables» de las bacterias, como su morfología, desarrollo, y propiedades bioquímicas y metabólicas.
       • Dentro de esta batería de pruebas bioquímicas se destacarían las:
         • Características macroscópicas: morfología y hemólisis; Cultivo: Medios de cultivo y requisitos de crecimiento en relación a atmósfera, temperatura y nutrición.
           • Pruebas bioquímicas, diferenciando
             • 1) Pruebas que se utilizan en la identificación preliminar y con lectura inmediata como la catalasa y oxidasa
               • 2) otras pruebas rápidas, con lectura en menos de 6h tal y como la hidrólisis del hipurato, la β-galactosidasa (ONPG), las aminopeptidasas, la uresa y el indol
                 • 3) pruebas lentas, con lectura de 18 a 48h que incluirían la óxido-fermentación, reducción de nitratos, rojo de metilo, Voges-Proskauer, Agar hierro de Kligler, fermentación de azúcares, hidrólisis de la esculina, coagulasa, fenilalanina-desaminasa, DNasa, hidrólisis de la gelatina, decarboxilasas, lipasa, lecitinasa, utilización de citratos, utilización de malonato, y prueba de CAMP entre las más frecuentes
     • Métodos moleculares
       • La ausencia de concordancia entre las características observables, morfológicas y/o fenotípicas del aislamiento en estudio y las correspondientes a la(s) cepa(s) de la especie tipo, hacen que los métodos fenotípicos realizen la identificación más probable y no definitiva.
         • El ARNr 16S (rrs)
           • 16S-23S ARNr
             • ARNr 23S
               • subunidad β de la ARN polimerasa,subunidad ß de la ADN girasa

3. PARASITARIA

   • Método directo
     • Observación del agente etiológico
   • Método indirecto
     • detección indirecta del parasito
   • Método de Strout para diagnosticar la enfermedad de Chagas Biopsias