Tinciones básicas en el laboratorio

Tinciones básicas en el laboratorio

1. Tinción de Gram

   • Es un procedimiento de gran utilidad, en lugares que manejen pruebas microbiológicas
     • Es definida como una tinción diferencial, usa 2 colorantes y clasifica las bacterias en 2 grupos: Gram + y Gram -
       • Desarrollada por Han Christian Gram en 1884, sigue siendo de las mas utilizadas por lo barata, sencilla y eficaz que es.
         • Es muy útil porque se se puede saber rápido y directamente las caracteriíticas de los organismos causantes de la infección.
           • Los principios de la tinción están basados en la pared celular de las bacterias
             • Las bacterias Gram negativo tienen una pared celular compuesta por una capa de peptidoglicano y una membrana celular externa
               • Se basa en colocar el colorante primario cristal violeta, que tiene afinidad al peptidoglicano, luego coloca lugol que impide la salida del cristal violeta. Despues añade una mezcla alcohol-acetona, que deshidrata la pared celular y los poros destruyendo la pared de las Gram negativo.
             • Las bacterias Gram positivo poseen una pared celular gruesa de peptidoglicano pero no con membrana celular externa.
               • Se basa en colocar el colorante primario cristal violeta, que tiene afinidad al peptidoglicano, luego coloca lugol que impide la salida del cristal violeta. Después añade una mezcla alcohol-acetona, que deshidrata la pared celular y los poros destruyendo la pared de las Gram negativo. Por ultimo se coloca safaranina , la cual es el colorante secundario o de contratinción

2. Tinción de Wright

   • Es una técnica utilizada para la diferenciación de elementos celulares de la sangre y es clasificada como tinción policromática.
     • Desarrollada por James Homer Wright en 1902, tiene distintos usos en la microbiología y parasitología, se usa en la búsqueda de hematozoarios.
       • El reactivo está compuesto de eosina y azul de metileno. La eosina tiene afinidad a componentes alcalinos, se puede usar la eosina amarilla y la eosina B sin diferencias notables.
         • Es un compuesto ácido con polaridad negativa, le permite enlazarse con constituyentes celulares positivo, coloreando el citoplasma.
           • La tonalidad de la tinción es rosada-anaranjada para citoplasma y rojo intenso en el caso de los eritrocitos.
             • La interacción molecular entre eosina y un complejo azul de metileno-DNA
               • Los colores pinta de morado los núcleos y gránulos neutrofílicos, rosa el citoplasma y los ácidos nucleicos se pintan de azul.

3. Tinción de Ziehl-Neelsen

   • Es la Técnica usada en el diagnóstico de la tuberculosis.
     • Es rápida, sencilla y de bajo costo, por lo que se puede hacer en casi cualquier laboratorio clínico.
       • Permite diferenciar a las bacterias de dos grupos, los capaces de resistir decoloración alcohol-ácido y los que no.
         • Heinrich Herman Robert Koch desarrolló una de las primeras tinciones usando azul de metileno pero fueron los trabajaos de Paul Elrich y de Franz Ziehl y Karl Neseen los que terminaron la tinción.
           • La pared celular de las micobacterias es muy compleja. Esta compuesta de ácido mesodiaminopimélico, alanina, ácido glutámico, ácido murámico, arabinosa y galactosa.
             • La tinción se basa en colocar carbol-fuscina y calentar la preparación. Para solubilizar las ceras, lípidos y otros ácidos grasos y pueda pasar el colorante con afinidad a los ácidos micólicos
               • Al enfriar, los componentes de la pared se vuelven a solidificar, resistiendo la accióon abrasiva del alcohol-ácido, y el azul de metileno usado como contratinción.
                 • Una tinción positiva es cuando son de color rojo fucsia

4. Tinción negativa

   • Desarrollada para microscopia de luz con el fin de rodear y delinear bacterias no teñidas u materiales biológicos
     • Se utilizan diferentes métodos de tinción negativa para evaluar estructuras individuales desde muy pequeños hasta muy grandes.
       • Es muy útil pero está limitada, por la presencia de un fondo oscuro que no permite una correcta identificación de forma nítida.
         • En microbiología proporciona un resultado presuntivo de Cryptococcus neoformans, causante de la meningitis en pacientes con inmunosupresión.
           • El principio es simple, solo se pone una gota de la muestra en un portaobjetos, se coloca el colorante y se observa al microscopio sin fijación. Algunas estructuras difundirán el colorante y otras no.
             • La principal dificultad es que los microorganismos tienden a contraerse durante el periodo de secado, para ello se usa la tinción negativa húmeda.
               • Además de ser sencilla, muy barata y no requiere equipos o material costoso para su realización.

5. Tinción de azul algodón de lactofenol

   • Para la correcta identificación de hongos de interés clínico, es necesario observar las estructuras fúngicas con una alta calidad y contraste.
     • Para ello se urilizan diversos compuestos químicos que permitan la tinción entre la pared y el citoplasma de las células fúngicas.
       • La tinción de azul de algodón de lactofenol no es considerada diferencial, pero posee características que permiten observar cada uno de los componentes fúngicos.
         • El fenol inactiva las enzimas líticas de la célula e impide que ésta se rompa. destruye la flora acompañante e inactiva la célula.
           • Quitando el grado de patogenicidad. El ácido láctico preserva las estructuras fúngicas al provocar un cambio de gradiente osmótico con relación al interior fúngico
             • El azul de algodón es un colorante ácido, que tiñe el citoplasma y la quitina presente en las células fúngicas, el glicerol mantiene húmeda la preparación.
               • Se recomienda someter al hongo a condiciones donde no se favorezca su crecimiento.

6. Carlos Enrique Romo Ortiz 551

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