INMUNOENSAYOS

INMUNOENSAYOS

1. DEFINICIÓN

   • Prueba que usa complejos de anticuerpo y antígeno como medio para generar un resultado perceptible.

2. ANTICUERPOS

   • POLICLONALES
     • Se combinan con diferentes epítopes de un antígeno multivalente.
     • Se producen inyectando una solución que contenga el antígeno a un animal, para después recolectar el suero rico en anticuerpos.
   • MONOCLONALES
     • Son muy específicos para un epítope simple en un antígeno multivalente
     • Se producen a partir de una línea celular simple utilizando hibridomas (células tumorales) y líneas celulares de mieloma de ratón.
   • Se usan para detectar antígenos

3. CATEGORÍAS DE LAS TÉCNICAS DE INMUNOENSAYO

   • NO COMPETITIVOS
     • Se le conoce como ensayo "sandwich" ya que el analito está unido entre dos reactivos de anticuerpos muy específicos.
     • DOS PASOS
       • Emplea etapas de lavado en el que se aísla y se lava el complejo para quitar el exceso del reactivo marcado no unido y cualquier otra sustancia que interfiera.
       • Ofrece la mayor especificidad y sensibilidad
   • COMPETITIVOS
     • El analito sin marcar se mide por su capacidad para competir con un antígeno marcado.
     • UN SOLO PASO
       • El reactivo del antígeno marcado como la muestra sin marcar compiten por una cantidad limitada de anticuerpo.
     • DOS PASOS
       • La concentración de anticuerpo del reactivo se encuentra presente en exceso.
   • HOMOGÉNEOS
     • No requieren la separación de los complejos no unidos de los complejos unidos.
   • HETEROGÉNEOS
     • Requieren la separación de los complejos no unidos

4. TÉCNICAS DE DETECCIÓN

   • RADIOINMUNOENSAYOS
     • Utilizan isótopos radioactivos como marca y la concentración de radioactividad medida indica la concentración de analito presente
   • INMUNOENSAYO ENZIMÁTICO
     • Usa un cambio de color, emisión de luz
   • ELISA
     • Representa una aplicación popular del inmunoensayo sándwich heterogéneo de fase sólida.
       • Combina un reactivo marcado enzima-anticuerpo con un anticuerpo unido a una fase sólida
   • POLARIZACIÓN DE FLUORESCENCIA
     • Se utiliza para la medición de drogas terapéuticas, y las drogas de abuso, toxicología y algunas hormonas.
     • FLUORESCENCIA
       • Absorbe la energía de la luz a 490nm y libera esta energía a una longitud de onda superior (520nm) como luz fluorescente
     • ROTACIÓN DE MOLÉCULAS EN LA SOLUCIÓN
       • Molécula más pequeña antígeno-fluoresceína: AgF, que rota rápidamente, y los complejos Ab-AgF más grandes , que rotan lentamente en la solución
     • LUZ POLARIZADA
       • Distingue la marca antígeno-fluoresceína (AgF) del antígenofluoresceína (Ab-AgF) unido al anticuerpo por sus diferentes propiedades de polarización
     • RESULTADOS
       • Se muestran como una curva inversa por cuanto a valores bajos de analito del paciente producen una señal más alta
   • MAGNÉTICO QUIMIOLUMINISCENTE (CMIA)
     • Una marca quimioluminiscente produce luz cuando se lo combina con un reactivo ?trigger?.
     • Utilizan la tecnología de ensayo sándwich no competitiva para medir analitos, la concentración de señal medida es directamente proporcional a la concentración de analito presente en la muestra.
   • MICROPARTÍCULA (MEIA)
     • Se cubre una micropartícula de fase sólida con anticuerpos en contra de un antígeno de interés, y se usa para capturar el analito
     • Análisis cardíaco, de fertilidad, de cáncer, metabólico, de hepatitis, y de tiroides.
     • La concentración de analito es proporcional a la cantidad de señal medida.

5. FACTORES DE IMPACTO EN EL RENDIMIENTO ANALÍTICO

   • EXACTOS
     • Capacidad de medir la concentración correcta de analito en una muestra
   • PRECISOS
     • Combinación de reactivos, analizador y otros factores puede proporcionar resultados reproducibles
   • IMPACTO DEL CALIBRADOR
     • Soluciones con valores conocidos que establecen la relación entre la cantidad de señal producida en el ensayo y la concentración de analito.
     • COMPARAR
       • Los niveles de señal producidos por las muestras de un paciente, se puede determinar el valor de concentración e analito de un paciente, o el resultado
       • Si la calibración no es correcta, los resultados del paciente no serán correctos
       • Los calibradores líquidos, refrigerados y listos para usar aseguran menos posibles errores por parte del operador comparados.
     • MATRIZ
       • Solvente que contiene al analito en el calibrador, pueden ser de suero animal, acuosas, o derivadas de otros materiales.
   • IMPACTO DEL CONTROL
     • Muestras que contienen concentraciones conocidas de analito. Se utilizan para monitorear la exactitud y la precisión del rendimiento de un ensayo y de un analizador.
     • ANÁLISIS DEL PACIENTE
       • Si el control se encuentra dentro del rango, se supone que el rendimiento de los reactivos y del analizador es correcto y puede comenzar.
   • INTERFERENCIA EN LOS ENSAYOS
     • En la mayoría de los casos se deben a agentes que interfieren en la unión de anticuerpos con antígenos por varias razones
     • DE UN PASO
       • Tendencia a las interferencias que afectan tanto la sensibilidad como la especificidad.
     • DE DOS PASOS
       • Reducen la interferencia de un efecto hook en concentraciones elevadas o la presencia de anticuerpos HAMA
     • EFCTO HOOK
       • Fenómeno inherente a los diseños de los ensayos sándwich de un paso
       • Se refiere al gancho que se observa en la curva de respuesta a la concentración cuando la información se traza como una señal versus la concentración de analito.
       • Concentraciones muy elevadas de antígeno de la muestra del paciente se unen a todos los sitios disponibles saturándolos, por el anticuerpo-fase sólida y el anticuerpo-conjugado marcado y así evitar la formación sándwich.
     • ANTICUERPOS HUMANOS ANTI-RATÓN (HAMA)
       • Pueden estar presentes en el suero de pacientes que hayan sido tratados con anticuerpos de ratón para alguna terapia o se hayan expuesto a ratones de alguna otra manera.

6. EJEMPLOS DE PRUEBAS QUE UTILIZAN INMUNOENSAYOS

   • HORMONAS ENDOCRINAS
     • Glándulas endocrinas como hipotálamo, lóbulo pituitario anterior, glándula tiroidea, ovario, testículo, corteza suprarrenal, placenta, y páncreas.
     • Hormonas para analizar tiroides: TSH, T4, T3.
     • De fertilidad: FSH, LH, prolactina, estrógeno, progesterona, testosterona y hCG
     • Metabolismo: Cortisol.
   • INDICADORES DE LESIÓN CARDIOVASCULAR
     • Ayuda para evaluar el daño cardíaco durante o después de un infarto de miocardio mediante el análisis de proteínas específicas liberadas
     • TROPONINA: se libera en células musculares muertas o dañadas, aumenta a las 4 horas del infarto
     • MIOGLOBINA: aumenta a las 2 horas del infarto, para análisis de diagnóstico prematuro
     • CK-MB: aumenta a las 4-6 horas después del infarto, para diagnósticos de emergencia
     • PÉPTIDO NATRIURÉTICO DE TIPO B: Se libera al estrés o lesión del ventrículo izquierdo
     • PROTEÍNA REACTIVA C DE ALTA SENSIBILIDAD: útil para predecir riesgo de otro infarto
   • HEPATITIS
     • Se utilizan con fines de diagnóstico y monitoreo
     • HAV: De inicio generalmente abrupto, vía de transmisión fecal-oral. HBV: De aparición generalmente insidiosa, vía de transmisión por contacto sexual, agujas contaminadas, transfusiones, tatuajes. HCV: Similar a HBV. HDV: Similar a HBV de inicio generalmente abrupto. HEV: De inicio generalmente abrupto con vía de transmisión por ingesta de agua contaminada.
   • MARCADORES TUMORALES
     • Las células tumorales pueden producir proteínas que se detectan en suero por medio del inmunoensayo, generalmente son específicos para un cierto tipo de cáncer.
     • ANTÍGENO ESPECÍFICO DE PRÓSTATA (PSA): para cáncer próstata
     • ALFA FETOPROTEÍNA (AFP): cáncer testicular, test síndrome de Down, estomago, esófago
     • hCG: cáncer testicular, mama, tracto IG, pulmón, ovario
     • ANTÍGENO CARCINOEMBRIONARIO (CEA): colon rectal, tracto IG
     • MARCADORES DE CARBOHIDRATOS: cáncer de mama, carcinoma de ovario y endometrio
     • PROTEÍNAS MONOCLONAL IgA E IgG: Mieloma múltiple
   • PRUEBAS CONGÉNITAS
     • Miden ciertos agentes infecciosos que son especialmente perjudiciales si un feto está expuesto.
     • Las pruebas para exposición a la Rubeola, Toxoplasmosis, y CMV son de especial importancia para el “screening” de embarazadas y gente con inmunosupresión.
     • POSITIVO EN ANTICUERPOS IgM: recientemente ha estado expuesto al virus y se encuentra preparando una pronta respuesta inmunológica
     • POSITIVOS EN ANTICUERPOS IgG: estuvo expuesto por lo menos varios meses antes de la prueba, y puede ser un infectado crónico.
   • PRUEBAS METABÓLICAS
     • Funciones metabólicas y deficiencias nutricionales.
     • FERRITINA: como medida de los niveles de almacenamiento de hierro niveles bajos indican anemia o dieta deficiente.
     • VITAMINA B12: Anemia macrocítica y enfermedades neurológicas
     • FOLATO: Defectos de nacimiento en columna vertebral o anemia megaloblástica

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