CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFIA

1. Cromatografia em camada delgada

   • A separação dos componentes de uma mistura ocorre através da migração diferencial sobre uma fase estacionária composta por uma fina camada de adsorvente aplicado sobre um suporte plano
     • A fase móvel por sua vez é constituída por diversas misturas de solventes e permanece no interior de um recipiente ou cuba de material transparente e inerte, geralmente vidro, permanecendo vedada, onde se deposita a cromatoplaca em posição vertical sob uma atmosfera saturada da fase móvel.
       • Identificação: posição final de cada mancha é designada pelo Rf (fator de retenção). Após a revelação da cromatoplaca, mede-se a distância atingida por cada mancha a partir da origem. Essa distância é uma fração da distância total percorrida pelo solvente na fase estacionária
         • Rf = (distância atingida pela mancha a partir da origem) / (distância percorrida pelo solvente desde a origem)
   • Equipamentos
     • Placa
     • Cuba
     • Fase estacionária
     • Fase móvel
     • Sistema revelador
   • Fases estacionárias
     • Sílica
     • Alumina
     • Kieselguhr
     • Celulose
     • Poliamida
     • Silicato de magnésio

2. Cromatografia em papel

   • Utiliza para a separação e identificação das substâncias ou componentes da mistura a migração diferencial sobre a superfície de um papel de filtro de qualidade especial
     • A separação cromatográfica ocorre por meio da ação da fase móvel líquida semelhante ao processo da adsorção em cromatografia em coluna
       • Cromatograma é desenvolvido pela passagem lenta da fase móvel sobre a camada de papel,o desenvolvimento pode ser ascendente, no caso de solvente carreado para cima através de forças capilares, ou descendente, no caso em que o fluxo do solvente é auxiliado por força da gravidade
         • A forma mais simples da cromatografia em papel é a cromatografia ascendente que utiliza uma tira de papel de comprimento e largura variáveis, em função da cuba cromatográfica a ser utilizada
           • Este método é muito útil para separar substâncias muito polares, como açúcares e aminoácidos.
   • Equipamentos
     • Consiste em câmara ou cuba cromatográfica de vidro, provida de bordas e tampa esmerilhadas e de dimensões adequadas para conter o papel cromatográfico, que pode ser adaptado para cromatografia ascendente ou descendente
       • Utilizar papel de filtro especial para cromatografia, cortado no sentido das fibras em tiras de comprimento variável e largura de, no mínimo, 2,5 cm. Existem vários tipos de papel para cromatografia com finalidades diferentes para separação de substâncias hidrófilas ou hidrofóbicas, orgânicas ou inorgânicas, anfóteras ou com muitas hidroxilas, entre outras
   • Procedimento
     • Ascendente
     • Descendente

3. Cromatografia em coluna

   • Cromatografia preparativa em coluna é um método de separação que desempenha um papel importante na purificação de substâncias de valor na investigação, na operação de planta piloto e produção de produtos farmacêuticos
     • É um método que pode ser utilizado, de maneira rápida e econômica, para a obtenção de substâncias com pureza elevada
       • Na prática, adsorventes padronizados são utilizados, pois fornecem um alto grau de confiabilidade do método, a transferência direta de escala de análise e um processamento otimizado
   • Equipamentos
     • Os aparelhos utilizados para procedimentos em colunas cromatográficas consistem de um tubo cromatográfico cilíndrico, em posição vertical, de vidro (ou outro material inerte e transparente especificado na monografia individual), de comprimento e diâmetros variáveis, em cuja parte inferior há estrangulamento (de passagem reduzida) e torneira para regulagem da vazão dos solventes utilizados para a eluição
   • Procedimentos
     • Por adsorção
     • Por participação
     • Por troca iônica

4. Cromatografia a líquido de alta eficiência

   • Cromatografia de íons
     • Esta técnica é baseada em um processo de separação dos componentes da amostra entre duas fases: fase móvel e fase estacionária
       • O processo de separação é resultante de interações específicas entre as espécies presentes na amostra em ambas as fases
         • O mecanismo de interação com a fase estacionária é a troca iônica, onde as colunas utilizadas são constituídas por um grupo funcional carregado, geralmente SO3 - , COO- , NH3 + , NR3 + ligado a uma matriz polimérica, como sílica ou copolímero do tipo poliestireno-divinilbenzeno
           • A fase móvel também contém espécies iônicas, ocorrendo, desta forma, uma competição entre a distribuição das espécies presentes na amostra entre a fase móvel e a fase estacionária
             • Para cada íon, o processo de troca é caracterizado pelo equilíbrio de distribuição entre a fase móvel e a fase estacionária
     • Procedimento
       • Para operar o cromatógrafo de íons, recomenda-se seguir as instruções do fabricante. As determinações são feitas por comparação com soluções de referência, contendo concentrações conhecidas do analito
   • A cromatografia a líquido de alta eficiência é uma técnica de separação fundamentada na distribuição dos componentes de uma mistura entre duas fases imiscíveis, a fase móvel, líquida, e a fase estacionária sólida, contida em uma coluna cilíndrica
     • As separações são alcançadas por partição, adsorção, troca iônica, exclusão por tamanho ou interações estereoquímicas, dependendo do tipo de fase estacionária utilizada
   • Aparelhagem
     • Reservatório com fase móvel
     • Bomba
     • Injetor
     • Coluna cromatográfica
     • Dispositivo de captura de dados
       • Software integrador ou registrador
   • Adequabilidade do sistema
     • São aplicados com a finalidade de verificar se a resolução e a reprodutibilidade do sistema cromatográfico estão adequadas para as análises a serem realizadas

5. Cromatografia a gás

   • A cromatografia a gás é uma técnica de separação cromatográfica baseada na diferença de distribuição de espécies de uma mistura entre duas fases não miscíveis, na qual a fase móvel é um gás de arraste que se move através da fase estacionária contida em uma coluna
     • A CG é baseada no mecanismo de adsorção, distribuição de massa ou exclusão por tamanho
       • É aplicável a substâncias e seus derivados que se volatilizam nas temperaturas empregadas, e é utilizada para identificação, teste de pureza e determinação quantitativa
   • Equipamentos
     • Fonte de gá de arraste
     • Controlador de fluxo
     • Câmara de inejção
     • Coluna cromatográfica contida em um forno
     • Detector
     • Sistema de aquisição de dados

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