TESTES IMUNOLÓGICOS

TESTES IMUNOLÓGICOS

1. ELISA DIRETO

   • Procura antígeno;
     • Fundo da placa com anticorpo;
       • Adiciona AC marcado com enzima;
         • Não reage = Negativo
     • Reage com cor = Positivo
   • VANTAGENS
     • Alta sensibilidade e especificidade;
     • Reagentes estáveis;
     • Bom custo x benefício;
     • Quantitativo e qualitativo
   • DESVANTAGENS
     • Susceptível a erros mecânicos;
     • Alguns reagentes utilizados no teste são vulneráveis;
     • Teste que necessita de mão de obra especializada;

2. ELISA INDIRETO

   • Procura anticorpo;
     • Fundo da placa com AG;
       • Adiciona amostra do paciente;
         • Anticorpo marcado com enzima;
           • Não reage = Negativo
     • Reage com cor = Positivo

3. IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA

   • metodologia baseada em uma marcação pelos antígenos;
     • Utilizados tanto nos tecidos quanto em soro humano ou animal;
   • A técnica de imunofluorescência serve para diagnóstico de doenças tanto em humanos como em animais. Doenças dermatológicas como dermatites, pênfigos, lúpus, líquen, dermatoses, colagenases, no diagnóstico de sífilis, de autoanticorpos autoimunes, detecção direta de microrganismos como bactérias, parasitas, em secreções como urina, fezes, cortes histológicos de tecidos (tumores) e investigação de parasitoses e doenças envolvendo a medicina veterinária.
   • VANTAGENS
     • Possibilita uma ótima fluorescência;
       • Permite-se trabalhar com vários anticorpos primários específicos para vários sítios de antígenos, sendo eficaz na identificação ao qual o anticorpo pertence, abrangendo o campo de diagnóstico mais preciso.
         • Ambas possuem uma grande sensibilidade ao teste, e não demandam muito tempo de realização; Especificidade, reprodutibilidade, simples padronização, são capazes de localizar antígenos intra e extracelulares.
   • DESVANTAGENS
     • Está na intensidade dos fluorocromos que às vezes dificultam o diagnóstico, a metodologia é cara e o custo da manutenção dos aparelhos e do microscópio é alta, a técnica é realizada manualmente podendo ocasionar erros e subjetividade na leitura.

4. IMUNOCROMATOGRAFIA

   • teste rápido que identifica doenças infecciosas, hormônios e outros analitos, por associação específica a anticorpos com partículas coloridas conjugadas.
     • O resultado de um teste de imunocromatografia geralmente considera a presença de antígenos na amostra.
   • Além da COVID-19, existem testes imunocromatográficos para várias outras doenças, como zika, dengue, sífilis e até mesmo HIV.
   • VANTAGENS
     • Rapidez;
     • Baixo custo;
     • Praticidade;
   • DESVANTAGEM
     • Baixa sensibilidade;

5. RADIOIMUNOENSAIO

   • O radioimunoensaio quantifica reações antígeno-anticorpo, permitindo medidas precisas em amostras desconhecidas.
     • É uma metodologia de quantificação, que se soma às técnicas biológicas, químicas e físicas empregadas na dosagem de substâncias de importância biológica.
   • DESVANTAGENS
     • Isótopos radioativos
     • Laboratório tenha licença especial
     • Necessidade de instalações adequadas para manipulação e descarte

6. QUIMIOLUMINESCÊNCIA

   • Consiste na produção de luz a partir de uma reação química.
   • Dois produtos químicos reagem para formar um intermediário excitado
   • VANTAGENS
     • Exame basicamente automatizado e rápido
     • Várias amostras podem ser analisadas e distintas moléculas podem ser quantificadas de uma só vez.
     • Opção de ensaio com elevada sensibilidade
   • Quantifica antígeno ou anticorpo presente em fluidos corporais.
   • Muito usado para dosagem de hormônios, marcadores tumorais e outras proteínas séricas.
   • Um dos métodos de escolha pra substituir o radioimunoensaio.

7. WESTERN BLOTTING

   • Método utilizado para a imunodetecção de proteínas após sua separação por eletroforese em gel e transferência de um extrato proteico para uma membrana adsorvente.
   • Permite detectar, caracterizar e semi-quantificar múltiplas proteínas, principalmente aquelas que estão em baixas quantidades na amostra.
   • Western Blotting pode ser usada:
     • Análise do tamanho e quantidade de uma determinada proteína;
       • Diagnóstico de doenças em humanos e animais;
         • Teste confirmatório para o HIV, detectando anticorpos anti-HIV no soro do paciente.
           • Detecção de proteínas defeituosas.
   • VANTAGENS
     • Alta sensibilidade e especificidade;
       • Reconhecimento de antígenos individuais em um estrato;
         • Realização de perfil de reconhecimento de antígenos;
           • Determinação de proteínas imunodominantes;
   • DESVANTAGENS
     • Custo médio a elevado;
     • Procedimento longo e propenso a erro em vários passos;
     • Pode haver problemas de biossegurança;

8. IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA

   • Utiliza-se este tipo de imunofluorescência, também conhecida como técnica de dupla camada, na detecção de anticorpos no soro do paciente por meio de antígenos fixados em uma lâmina, na qual se aplica primeiramente um anticorpo específico não fluorescente.
   • Esta técnica tem como vantagem possibilitar uma fluorescência mais evidente, uma vez que os anticorpos fluorescentes associam-se somente aos anticorpos primários, além de permite trabalhar com diversos anticorpos primários específicos para distintos tipos de antígenos, sendo capaz de identificar qual a classe a qual o anticorpo pertence.