Carotenos

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carotenos
Jorge Revilla
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Jorge Revilla
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Resource summary

Flowchart nodes

  • Inicio
  • Pesamos las muestras (previamente trituradas)
  • Añadimos 2mL de MeOH HPLC y 1,5mL de Tris-HCl
  • Ver preparación del Tris-HCl
  • Agitamos durante 5 minutos a 4ºC
  • Añadimos 4mL de cloroformo
  • Centrifugamos 10 minutos a 700 rpm
  • Recuperamos la fase inferior
  • Fase recupetrada
  • Resto
  • Matraz topáceo de fondo redondo 
  • Repetimos la extracción  5 a 8 veces con 3mL de cloroformo
  • Evaporamos el cloroformo con el rotavapor a 40ºC
  • Basura
  • El resto se disuelve en 3,6ml de MeOH de pureza HPLC
  • Añadimos 400 uL de KOH al 60% y agitamos en atm. anóxica
  • Se deja reposar en oscuridad toda la noche
  • Calentamos a 50ºC durantre 20-30 minutos
  • Trasvasamos a tubos de 15mL
  • Limpiar matraces; 2mL de agua MiliQ, 2mL de solución A, 1mL de cloroformo y 4mL de sol. A
  • Agitamos y recuperamos la fase superior. A 4ºC  y oscuridad
  • Añadimos 2mL de sol.A, agitamos y pasamos la fase superior al Falcon
  • Repetir hasta que la Sol. A sea incolora
  • Medimos el volumen recuperado de manera precisa
  • Y añadimos Sol.A hasta conseguir un volumen conocido
  • Pinchamos en el UPLC
  • Miramos su absorbancia (270-540nm)
  • Fin
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