Técnicas histológicas

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Técnicas histológicas
  1. Coleta de material
    1. Fixação
      1. Clivagem
        1. Descalcificação
          1. Processamento
            1. Inclusão
              1. Microtomia
                1. Coloração
                  1. Selagem
                    1. Observação ao microscópio
                      1. Montagem da lâmina para visualização
                      2. Processo que evidencia as estruturas teciduais
                        1. Tipos
                          1. Coloração química: ligações químicas
                            1. Coloração física: difusão dos corantes
                          2. Blocos seccionados em fatias finas, permitindo assim, a visualização das células e elementos intracelulares pela microscopia de luz (corte realizado pelo micrôtomo)
                          3. Colocação do tecido em molde de parafina que permite a microtomia
                            1. Formação do bloco histológico
                          4. Desidratação
                            1. Clarificação
                              1. Processo de remoção do álcool nos tecidos através de um agente clarificador. Assim, a parafina pode penetrar completamente no interior dos tecidos
                                1. Infiltração
                                  1. Saturação das cavidades dos tecidos ou das células por uma substância que é geralmente o meio que estes serão inclusos
                                2. Completa remoção da água na amostra para utilizar a parafina, que é hidrofóbica. Feita por difusão de agentes desidratantes
                                3. Reúne procedimentos que visam substituir a água dos tecidos por um meio mais sólido, que confira resistência e dureza suficiente
                                4. Tipos
                                  1. Ácidos (mais utilizados na histologia); Histoquímicos; Soluçnoes descalcificadoras patenteadas; Resinas de troca iônica; Descalcificadores eletrolíticos
                                  2. Fatores a serem levados em conta para escolha do método
                                    1. Urgência do material; O grau de mineralização do tecido; A coloração a ser empregada; O tipo de fixador utilizado
                                  3. Processo de redução de tamanho e espessura dos fragmentos fixados
                                    1. Permite, de forma mais eficaz, a penetração do fixador e subsequentemente a melhor difusão dos reagentes durante o processamento histológico
                                    2. Principal etapa das técnicas histológicas
                                      1. Objetivos:
                                        1. Evitar a autólise e a proliferação bacteriana; Parar o metabolismo celular; Preservar os tecidos; Melhorar a diferenciação óptica das células; Manter as relações topológicas e morfológicas das biomacromoléculas o mais próximo da situação "in vivo"
                                        2. Métodos:
                                          1. Químicos: Processo de estabilização de biomoléculas pela ação de agentes químicos
                                            1. Físicos: Promove a conservação da amostra através de seu aquecimento ou resfriamento
                                            2. Fatores que influeciam
                                              1. Temperatura; Volume da mistura fixadora; Concentração; pH da mistura fixadora; Osmolaridade; Espessura da amostra; Tempo de fixação
                                            3. Procedimento de retirada de uma amostra biológica de um organismo vivo ou morto, obtidas através de biópsias, peças cirúrgicas ou necropsias
                                              1. Antes da coleta, deve-se organizar o espaço, separar os utensílios a serem utilizados durante o procedimento e preparar o líquido fixador em um frasco de boca larga
                                                1. Os órgãos produtores de enzimas devem ser retirados primeiro, já que nesses a autólise ocorre mais rapidamente
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