COLORIMETRIA Y ESPECTROFOTOMETRIA

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COLORIMETRIA Y ESPECTROFOTOMETRIA
  1. La espectrofotometria se basa en la capacidad de las sustancias químicas de absorber luz.
    1. Se puede utilizar 3 regiones del espectro electromagnético para evaluar el comportamiento espectrofotométrico de una sustancia.
      1. Región ultravioleta UV
        1. Entre 200 a <380 nm
        2. Región de luz VIS
          1. Entre 380 a <780 nm
          2. Región del infrarrojo IR
            1. 780 nm a <1000 mm
        3. Ecuación E=h..c/ λ
          1. h= Cosntante de Plank ( 6.62x 10^-27 erg/ s )
            1. c= Velocidad de la luz ( 3x 10^8 m/s)
              1. λ= Longitud de onda
              2. Transmitancia (T) de una solución se define como la fracción de luz incidente que es transmitida a través de una muestra en solución.
                1. T= %T x 100
                  1. A partir de la medición de la transmitancia es posible calcular:
                    1. Absorbancia ( A)
                      1. Densidad óptica (DO)
                        1. Extinción (E)
                          1. La determinación de la concentración de una sustancia se basa en la ley de Beer- Lambert.
                            1. Se describe la relación entre
                              1. La absorbancia (A)
                                1. Concentración del absorbente (C)
                                  1. Ancho de la celda (I)
                                    1. Equivale al trayecto recorrido por la radiación que se utiliza.
                                  2. Relación directamente proporcional entre absorbancia y concentración
                                    1. • La luz incidente debe ser monocromática
                                      1. • La longitud de onda utiliada debe coincidir con la longitud donde la sustancia presenta su máxima absorción
                                        1. • El solvente no debe interaccionar con el absorbente
                                          1. • El absorbente no debe estar a altas concentraciones.
                                2. PRACTICA 1
                                  1. PROCEDIMIENTO
                                    1. 1. CALIBRACIÓN DEL ESPECTROFOTÓMETRO CON BLANCO DE AGUA
                                      1. 1. Verificar que el colorímetro este en modo Transmitancia y que la longitud de onda de inicio sea 400 nm
                                        1. 2. Ajustar el equipo a 0% T girando suavemente la perilla izquierda
                                          1. 3. Preparar un tubo blanco con 5 ML de agua destilada
                                            1. 3.1 Introducirlo en una celda y cerrarla
                                              1. 3.2 Ajustar al 100% T con la perilla derecha
                                                1. 4. La calibración debe ser realizada SIEMPRE que se seleccione una nueva longitud de onda
                                          2. 2. CURVA ESPECTRAL DEL KMNO4
                                            1. 1. En un tubo de vidrio agregar 5 ml de la solución de KMnO4 2.5 x 10^-4 M
                                              1. 2. Leer la absorbancia de la anterior solución cada 10 nm en el rango de longitud de onda de 400 a 600 nm.
                                                1. Calibrar cada vez que cambie la longitud de onda con blanco de agua
                                                  1. 3. Registrar datos en tabla 2 y hacer gráfica en papel milimetrado de absorbancia vs longitud de onda.
                                                    1. 4. Determinar a cual longitud de onda el KMnO4 presenta máxima absorbancia.
                                              2. 3. CURVA DE CALIBRACIÓN KMNO4
                                                1. 1. A partir de la solución de KMnO4 2.5 x 10^-4 M
                                                  1. 1.1 Preparar los tubos del 1-5 de acuerdo a la indicaciones de la tabla.
                                                    1. 2. Seleccionar longitud de onda donde el KMnO4 presento la máxima absorbancia y calibre el colorímetro con el Blanco
                                                      1. 3. Medir la absorbancia de las soluciones preparadas previamente tubos de 1 a 5 y registrar en tabla
                                                        1. 4. Medir la absorbancia de la solución marcada como muestra problema y registrar en tabla.
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