Proteinexprimierung

Vorbereitung des Zielgens
1. PCR
  1. Reinigung
    1. Restriktionsverdau
      1. Reinigung
      2. 2 Restriktionsenzyme = 2 Schnittstellen
        Zielgen geht richtig ins Plasmid rein
        Verhinderung von Bindung mit sich selbst
  2. Denaturierung 95 °C 45 sek
    1. H-Brücken werden gebrochen
  3. Primer Annealing 52 °C 30 sek
    1. Forward und Reverse Primer binden an DNA
  4. Elongation 72 °C 2 min
    1. GoTaq-Polymerase baut dNTPs ein, braucht für 500 bp ca. 30 sek
Vorbereitung des Vektors
1. Restriktionsverdau
  1. Reinigung
Klonierung
1. Ligation
  1. Transformation
    1. Mini-DNA-Präparation
      1. Kontroll-Restriktionsverdau
Rekombinante Proteinexprimierung
1. Transformation
  1. Epression
    1. Zellaufschluss
      1. Reinigung
        Western Blot
    2. Zugabe von IPTG (Induktor)

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	Created by Svenja about 12 years ago