EXTRACCIÓN DE ADN

Diana Manzano
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EXTRACCIÓN DE ADN
1 INTRODUCCIÓN
1.1 Moléculas con información genética
1.1.1 Funcionamiento orgánico
1.1.1.1
1.1.2 Estructura molecular
1.1.2.1
1.1.2.1.1 Aislar cadenas de ADN
1.1.2.1.1.1
1.1.2.1.1.1.1 Primidinas
1.1.2.1.1.1.1.1 Citosina
1.1.2.1.1.1.1.2 Timina
1.1.2.1.1.1.2 Purinas
1.1.2.1.1.1.2.1 Adenina
1.1.2.1.1.1.2.2 Guanina
2 MATERIALES (Estudiante)
2.1 Muestra vegetal o animal
2.1.1
2.2 Batidora o picadora
2.2.1
2.3 Cloruro de sodio
2.3.1
2.3.1.1 Atracción de cargas (Soluble en agua)
2.4 Detergente liquido o shampoo
2.4.1
2.4.1.1 Disuelve (Lípidos)
2.4.1.2 Separa (Proteinas rodeando el ADN)
2.5 Colador
2.6 Ablanda carnes o zumos de piña o papaya
2.6.1
3 MATERIALES (Docente)
3.1 Agua destilada o mineral
3.1.1
3.2 Bicarbonato sodico
3.2.1
3.3 Varilla fina
3.3.1
3.4 Tubos de ensayo
3.4.1
3.5 Vaso de precipitados
3.5.1
3.6 Pipeta de 10 ml
3.6.1
3.7 Alcohol isoamilico y etilico a 0°
3.7.1
3.8 Nevera
3.8.1
4 Desarrollo de la práctica
4.1 Método 1
4.1.1 1.Disolver 5g de NaCl en H2O
4.1.1.1
4.1.1.2 2. Pesar 250g de material vegetal o animal
4.1.1.2.1 Impulsos hasta obtener macerado (10')
4.1.1.2.2 3. Filtrar macerado
4.1.1.2.2.1 4. Agregarlo a solución salina fria
4.1.1.2.2.1.1 Añadir 30 ml detergente y reposo (5min)
4.1.1.2.2.1.2 5. Añadir a tubo de ensayo mezcla (10ml)
4.1.1.2.2.1.2.1 Añadir 0.5g de Ablandador y agitar
4.1.1.2.2.1.2.2 6. Tubo inclinad, añadir alcohol isoamílico (10ml)
4.1.1.2.2.1.2.2.1 Reposo (5min)
4.1.1.2.2.1.2.2.2 7. Observar fragmentos de ADN enrollados (mayor tamaño)
4.2 Método 2
4.2.1 1. Preparar solución buffer
4.2.1.1 - 120ml agua destilada - 1.5g NaCl - 5ml NaHCO3 -5ml detergente
4.2.1.2 2. Cortar muestra que proporciona ADN
4.2.1.2.1 Trituralrla (impulsos=10')
4.2.1.2.2 3. Mezclar: 20ml triturado celular - 40ml buffer frio
4.2.1.2.2.1 Agitar fuertemente (2min) y filtrar restos vegetales
4.2.1.2.2.2 4. Agregar: 0.5g ablandador
4.2.1.2.2.2.1 5. 10ml de mezcla obtenida y depositar en tubo de ensayo
4.2.1.2.2.2.1.1 Tubo inclinado: añadir 10ml alcohol isoamílico
4.2.1.2.2.2.1.2 6. Observar fragmentos de ADN enrrollados (mayor tamaño)
4.3 Método 3
4.3.1 1. Mezclar; 1.5g NaCl - 5g NaHCO3 - 120ml Agua - 5ml Detergente
4.3.1.1 Mantenerlo frio
4.3.1.2 2. Transferir 15ml de solución a tubo de ensayo
4.3.1.2.1 Escupir 10 veces en sobre ella y mezclar
4.3.1.2.2 3. Tubo inclinado: Añadir 15ml alcohol isoamilico
4.3.1.2.2.1 4. Observar fragmentos de mayor tamaño de ADN enrrollados
4.4 Método 4
4.4.1 1. Vaso de agua: Disolver una cucharadita de NaCl y 3g Detergente
4.4.1.1 2. Agregar a la solución trozos de la parte central de cebolla
4.4.1.1.1 3. Adicionar mezcla a licuadora y accionar (30')
4.4.1.1.1.1 4. Obtener extracto y agregarlo a un tubo (1/4)
4.4.1.1.1.1.1 5. Añadir zumo de piña y mezclar
4.4.1.1.1.1.1.1 6. Agregar mismo volumen de alcohol
4.4.1.1.1.1.1.1.1 7. Dejar reposar hasta que forme zona turbia entre ambas capas
4.4.1.1.1.1.1.1.1.1 8. Extraer fibras blancas de ADN
4.5 Método Alternativo (Tinción de Feulgen)
4.5.1 1. Desnaturalización de la cadena
4.5.1.1 Separa purinas de las desoxirribosas (ADN)
4.5.2 2. Colocar muestra en portaobjetos e hidratar
4.5.3 3. Secar (1min)
4.5.3.1 4. Aplicar reactivo Feulgen
4.5.4 5. Observar coloración
5 Preguntas
5.1 1. Reactivos
5.1.1 Solución Buffer
5.1.1.1 Protege información genética (efecto tampón)
5.1.2 Alcohol
5.1.2.1 Purifica
5.1.3 Detergente
5.1.3.1 Rompe membranas (Disuelve lípidos - Separa proteínas)
5.2 2. Tampón de solución
5.2.1 Mantener el pH estable
5.2.2 Solución amortiguadora
5.3 3. Efecto del Alcohol
5.3.1 Purificación
5.3.2 Deshidratación
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