RFLP- Verfahren

Erdinc Albayrak
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Erdinc Albayrak
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Description

Durchführung
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RFLP- Verfahren
1 Bedeutung/ Geschichte
1.1 Veranschaulichung der unterschiedlichen Längen von wiederholenden DNA- Abschnitten
1.1.1 Verfahren von Alec Jeffrey im Jahre 1985 entwickelt
2 Durchführung
2.1 Vorprozedur
2.1.1 Isolierung DNA
2.1.1.1 Erkennung von Bausteinsequenzen, und Ausschneidung aus DNA
2.1.1.1.1 VTNR Abschnitte besitzen bestimmte Basenfolge eingerahmz und dadurch Erkennung "Schneideenzyme"
2.1.2 Längenordnung der DNA Fragmente/ Gel- Elektrophrorese
2.1.2.1 Agarose- Gel in einem elektrischen Feld pipettiert
2.1.2.1.1 DNA- Stücke wandern zum Pluspol, da Phosphat- Gruppe der DNA = negativ
2.1.2.1.1.1 Fragmente variieren in Geschwindigkeit und Masse
2.1.2.1.1.1.1 Je kürzer + leichter, desto schneller
2.1.2.1.1.1.1.1 Denaturierung
2.1.2.1.1.1.1.1.1 DNA- Stücke werden durch Erhitzung + Zugabe von Lauge zu Einzelsträngen aufgespalten
2.1.2.1.1.1.1.1.1.1 Fixierung
2.1.2.1.1.1.1.1.1.1.1 Stabilität + Positionbewahrung durch "Southern-Blot"
2.1.2.1.1.1.1.1.1.1.1.1 Enzelstränge auf Nylon- Membran übertragen und durch wärme fixiert
2.1.2.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1 Hybridisierung
2.1.2.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1 Bandenmuster durch DNA- Sonde sichtbar gemacht
2.1.2.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1 DNA- Sonden bestehen aus Enzym oder radioaktiv- makiertem
2.1.2.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1 Sind komplementär auf Nylon- Membran liegende DNA- Fragmente
2.1.2.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1.1 Fragmente leuchten schwach auf
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