Técnicas

1. Microscopio electrónico de transmisión MET
2. Microscopio electrónico de barrido MEB
3. Microscópico de fuerza atómica MFA

1. 1. Fijación
   1. Se utiliza para
      1. Acabar con el metabolismo celular
      2. Impedir la degradación enzimática por la autólisis
      3. Destruir microorganismos: bacterias, hongos o virus
      4. Endurecer el tejido (resultado de la formación de enlaces cruzados o desnaturalización de proteínas), conservando la forma de la estructura el tejido para tratamientos posteriores
   2. Las muestras deben sumerjirse en el fijador inmediatamente después de extraerse del organismo
   3. El fijador mas común: La formalina
      1. Solución acuosa con formaldehído al 37%
2. 2. Inclusión
   1. a. Después de la fijación la muestra se lava y se deshidrata en una serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta alcanzar 100% alcohol
   2. b. El aclarado. Se usa xileno o tolueno para extraer el alcohol y se infiltra la muestra en parafina fundida
   3. c. Se coloca la muestra en el micrótomo que lo corta en rebanadas finas. Los cortes obtenidos se montan sobre un portaobjetos de vidrio utilizando un medio de montaje (pineno o resinas de acrílico) como adhesivo
3. 3. Tinción
   1. a. La parafina se disuelve y extrae con xileno o tolueno.
   2. b. La muestra se rehidrata usando una serie de soluciones de alcohol de concentración decreciente.
   3. c. Se tiñe la muestra con hematoxilina en agua.
   4. d. Se deshidrata la muestra en una serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta alcanzar 100% alcohol y se tiñe con eosina en alcohol.
   5. e. Se pasa por xileno o tolueno y se le coloca un medio de montaje no acuoso antes de cubrirla con un cubreobjetos.

1. Un colorante ácido tiene una carga neta negativa
   1. Los grupos catiónicos reaccionan con los colorantes ácidos, mostrando acidofilia.
      1. -Filamentos citoplasmáticos -Componentes membranosos intracelulares -Fibras extracelulares
2. Un colorante básico tiene carga neta positiva
   1. Los grupos aniónicos reaccionan con los colorantes básicos, mostrando basofilia.
      1. -Heterocromatina y nucléolos -Componentes citoplasmáticos -Materiales extracelulares
3. Metacromasia: Cuando un tejido tiene polianiones, las moléculas del colorante estan tan cercas que forman aglomerados diméricos y poliméricos, cambiando el color original del colorante.
4. La fucsina básica decolorada reacciona con los grupos aldehído y resultan visiblemente rojos y es la base de las reacciones de ácido peryódico'reactivo de Schiff (PAS) y de Feulgen

1. Sirve para identificar y localizar enzimas en células y tejidos. Usando un reactivo de captura para atrapar o fijar el producto de reacción de la enzima

1. Inmunofluorescencia
   1. A la muestra se le añade fluorocormos para que reaccione con los anticuerpos (se unen entre sí), para que luego los anticuerpos especializados a un antígeno de algún organelo se unan a tal y pueda ser visible bajo un microscopio fluorescente

1. Las sondas complementarias pueden ser marcadas con isótopos radioactivos (se detecta visualmente mediante radiografía), un nucleótido modificado específicamente (p.e. digoxigenina, que se detecta por métodos inmunocitoquímicos), o biotina (se detecta por métodos citoquímicos)

1. Nucleoproteínas

   Annotations:

   • (ácidos nucleicos unidos a proteínas)
2. Proteínas intracelulares del citoesqueleto.
3. Proteínas extracelulares

   Annotations:

   • por ejemplo colágeno
4. Complejos de fosfolípidos y proteínas (o hidratos de carbono) en las membranas
5. Elementos morfógenos hísticos

   Annotations:

   • Moléculas que constituyen la estructura de las células y los tejidos

1. tRNA
2. Lípidos neutros
3. Glucógeno

   Annotations:

   • hidrato de carbono intraceluar común en el hígado y las células musculares
4. Proteoglucanos y glucosaminoglucanos

   Annotations:

   • hidratos de carbono complejos extracelulares que se encuentran en el tejido conjuntivo
5. Metabolitos intermedios
6. Glucosa
7. Sodio, cloro, etc.
8. Pueden conservase si se utilisan fijadores especiales, o en preparados especiales

1. La distancia mínima a la que es posible que un microscopio diferencie un objeto del otro.

1. Lente objetivo
2. Lente condensador
3. Platina
4. Lente ocular
5. Fuente luminosa

Annotations:

• Un error en el proceso de preparación

1. Poca pureza de sustancias químicas empleadas

   Annotations:

   • fijadores, reactivos, colorantes
2. Errores en la ejecución del preparado

   Annotations:

   • -Intervalos de fijación demasiados cortos o demasiados largos -Deshidratación -Inclusión -Coloración -Descuidos en el montaje y la colocación del cubreobjetos (pliegues) 
3. Equipo defectuoso

   Annotations:

   • microtomo con cuchilla defectuosa

1. Se usa más comúnmente en células vivas por qué no hace falta teñir los tejidos. Utiliza la refracción que diferentes partes de las estructuras emiten debido a su densidad.

   Annotations:

   • Se diferencia al microscopio de luz en que tiene un anillo anular y un anillo de fases.
2. De Interferencia
   1. Permite la cuantificación de masa en los tejidos.

1. Utiliza un condensador que ilumina la muestra con intensidad y de manera oblicua, de manera que aparece como si tuviera fondo negro y solo la luz refractada por la muestra penetra el objetivo.

1. Permite la visibilidad de moléculas fluorescentes que emiten luz de longitudes de onda mediante el uso de varios filtros y al ser expuestas a una luz UV.

1. Depende de la absorción de luz UV por las moléculas en la muestra. Se registra de manera fotométrica, por que el ojo humano no capta la luz UV y es dañino para el ojo

1. Permite visualizar muestras en 3D, los dos lentes (objetivo y fototubo) se alinean de manera perfecta para que la luz este enfocada para poder visualizar la muestra. Tiene una abertura del detector (orificio puntiforme), éste solo permite el paso a luz "en foco", permitiendo una claridad y una resolución muy buena.

1. Se diferencia al óptico de campo claro en que tiene un polarizador que se rota, la diferencia entre sus ángulos de rotación determina que tanto la estructura modifica la luz polarizada. Estructuras celulares muestran una birrefringencia (refracción doble), estas estructuras rotan el plano de luz polarizada.

1. Utiliza un haz de electrones en vez de luz, éstos pasan por varios lentes y la imagen se ve en una pantalla fluorescente recubierta de fósforo o se captura en una placa fotográfica.
2. Preparación de la muestra
   1. Fijación: el glutaldehído (preserva proteínas) seguido de un buffer; el tetraóxido de osmio reacciona con lípidos e imparte densidad.
   2. Después de deshidratarse, se infiltra con una resina que después se polimeriza
   3. La tinción se hace con metales pesados, lo iones se unen a los tejidos. Puede suceder al final o al mismo tiempo qué la fijación (p.e. tetraóxido de osmio) o deshidratación (nitrato de uranilo). Para reacciones histocitoquímicas o inmunocitoquímicas se utiliza fosfatasa y esterasa.
3. Criofactura: Técnica MET especial para el estudio de las membranas

1. Los electrones "barren" la superficie. Se utilizan los electrones retrodispersos (reflejados desde la superficie) y los electrones secundarios (expulsados de la superficie)

1. Utiliza una sonda puntiaguda muy fina (voladizo) que se mueve a través de la superficie de una muestra. Los movimientos ascendentes y descendientes se registran y forman una imagen gráfica. La punta puede captar informaciñon tocando la muestra (modo de contacto) o dándole golpecitos a través de la superficie (modo de percusión).