Técnicas histológicas

Técnicas histológicas

1. FIXAÇÃO:

   • Funções:
     • Evitar a autólise, a proliferação bacteriana e parar o metabolismo celular, mantendo o conteúdo bioquímico e preservando os antígenos
     • Reservar os tecidos para futuras colorações, manter as relações topológicas das biomacromoléculas o mais próximo da situação in vitro, melhorar a diferenciação óptica das células (preservando a identidade)
   • Formas:
     • Física: conservava por aquecimento -coagula proteínas (enzimas autolíticas) e dissolve lipídios- ou por resfriamento -retardando ou interrompendo processo de necrose e autólise
     • Química: estabilização de biomoléculas por agentes químicos, fixadores: agentes oxidantes, desnaturantes, fixadores de mecanismos desconhecidos e fixadores aldeídos -são os mais utilizados, pois possuem qualidade e baixo custo, exemplo: formaldeido- e combinacoes.

2. CLIVAGEM:

   • Processo de redução de tamanho e espessura dos fragmentos fixados, permitindo de forma mais eficaz a penetração do fixador no interior das amostras e a melhor difusão dos reagentes durante o processamento histológico
   • Deve formar amostras com espessura aconselhada de 3 milímetros, cada órgão ou fragmento tem um plano de clivagem que deve ser seguido e o corte deve ser firme e unidirecional- área de interesse evidente.

3. COLETA DO MATERIAL:

   • Retirada de uma amostra biológica de um organismo vivo ou morto obtida por biópsias, peças cirúrgicas e necropsia.
   • Órgãos produtores de enzima devem ser retirados primeiro, pois a autólise ocorre mais rapidamente,
   • Deve-se romper a cápsula dos órgãos encapsulados permitindo a melhor penetração do fixador, sendo que os tecidos devem ser manuseados sempre com cuidado.

4. PROCESSAMENTO:

   • Procedimentos que visam substituir a água que se encontra nos tecidos por um meio mais solido que confira resistência e dureza suficiente para ser cortado
   • Ocorre por meio de difusão de substâncias para dentro e para fora do tecido para atingir o ponto em que a concentração dos reagentes e do interior do tecido se torne igual.

5. SELAGEM:

   • Goma de damar diluída em xilol, uma gota da goma e recobrir a lâmina com uma lamínula, cuidar para não formar bolhas e prejudicar o corte histológico.

6. COLAÇÃO:

   • Depois da adesão dos cortes ás lâminas, eles devem ser corados para tornar os tecidos visíveis ao microscópio com auxilio de substâncias corantes, caracterizando ,também, células
   • Imprimem cores aos tecidos por mecanismos físicos (difusão dos corantes para o interior dos tecidos) e químicos (envolve ligações químicas), podendo por meio de auxocromos ácidos ou basicos.
   • EX: Hematoxilina: possui auxocromo básico ou catióico que cora o núcleo da celula. Eosina: auxocromo ácido que cora partes básicas como o citoplasma.

7. MICROTOMIA::

   • Blocos seccionados em fatias finas, permitindo assim, a visualização das células e elementos intracelulares pela microscopia de luz (micrôtomo: realiza o corte).

8. INCLUSÃO:

   • nclusão: amostra incluída em um molde de parafina que permite a microtomia, a parafina fundida deve ser completamente infiltrada.
   • Os tecidos ordenados são completados com a quantidade da parafina e ficam na placa refrigerada até que se soltem do molde.