CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS - Parte 1

CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS - Parte 1

1. Cultivo de segmentos, órgãos e células de plantas. Recipientes de vidro e em forma asséptica, com soluções de sais, nutrientes e reguladores do crescimento como meios de cultura.

2. Obtenção de plantas idênticas (clonagem vegetal), órgãos isolados ou células isoladas, idênticos o genótipo gerador que apresente as características desejáveis.

   • Totipotência
     • Regeneração é fundamentada na capacidade de proliferação das células vegetais organizarem-se em tecidos e plantas completas.

3. Reguladores do crescimento

   • Promotores do crescimento: auxinas, citocininas e giberelinas
   • Inibidores do crescimento: ácido abscísico
   • Etileno
     •  Liberação da latência, estimulação do crescimento e diferenciação dos brotos e raízes, é possível tenha relação na formação de raízes adventícias, estimulação da abscisão de folhas e frutos, estimulação na indução da floração, indução da feminidade nas flores dioicas, estimulação da apertura da flor, estimulação da senescência de folhas e flores, estimulação do amadurecimento dos frutos.
   • Brassinosteróides, poliaminas, ácido jasmônico e ácido salicílico

4. Planejamento de um laboratório

   • Assepsia
   • Sala de lavagem
   • Sala de preparação de meios
   • Sala de fluxos
   • Sala de incubação:
   • Estoque
   • Viveiro
     • Onde acontece aclimatização das plantas. Este deve permitir uma luminosidade, umidade e temperatura controladas; o chão preferivelmente de concreto ou qualquer material lavável; ar filtrado e sistema de exclusão de insetos; áreas de fertilização e preparação de solos; áreas para estoque de material.
   • Esterilização e assepsia
     • Autoclave
       • esterilização é o vapor úmido a alta temperatura e pressão.
     • Ar quente no fogão
     • Submerger em álcool e flameja no queimador
     • Lâmpada de luz UV
     • Soluções: álcool, hipoclorito de sódio ou de cálcio, peróxido de hidrogênio, água de bromo, nitrato de prata e cloreto de mercúrio.
       • Uma desinfestação comum é: 60 segundos em álcool, enxaguar com agua destilada estéril, 10 minutos em hipoclorito de sódio (se adicionam 2 gotas de detergente comercial como agente umectante), 3 enxagues em agua destilada estéril e secado com papel secante estéril.

5. Meios de cultura

   • SAIS MINERAIS
   • COMPOSTOS ORGANICOS
     • Como fonte de carbono geralmente se usa sacarosa a concentração de 2% - 3% mas, para algumas aplicações especiais pode se utilizar a 5% - 12%. Se usa glucose com monocotiledôneas ou frutose e amido com outras espécies. Tiamina em cultivos de células. Composto com efeitos estimulantes é inositol. Carboidratos, vitaminas, aminoácidos, amidas, algumas purinas e pirimidinas, hexitoles e ácidos orgânicos.  Outros são: sulfato de adenina, bases nitrogenadas, ácido cítrico, ácido málico.    
   • MATERIAL INERTE DE SUPORTE: O ágar, poliacrilamida, silicagel, polissacárido de ácido glucurónico “gelrite” (Bactérias Género Sphingomonas sp. Pseudômonas elodea), amido de diferentes cereais, polissacárido de xilose, arabidose e ácido galacturónico “isubgol” (sementes de Plantago ovata), algilatos do ácido algínico (algas Sp. Macrocrystis, Fucus e Laminaria) e polímeros sintéticos “biogel P200”.
     • Para meio líquido se pode usar um suporte como fibra de vidro ou papel filtro.
   • COMPLEXOS NATURAIS : Polpa de Banana da terra, endosperma de coco, emulsão de peixe, extrato de malta, suco de laranja, caseína hidrolisada ou hidrolisado proteico, suco de tomate e extrato de levedura.

6. Tecidos usados para cultura

   • RAIZ
   • MERISTEMAS
   • FOLHAS
   • ANTERAS E PÓLEN
   • CALOS
   • EMBRIÕES