TECNICAS HISTOLOGICAS

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1. Tinciones Básicas (Cationes)

Estos colorantes poseen una carga global positiva y tienen afinidad por los componentes del tejido que son ácidos o tienen carga negativa (estructuras basófilas).

• Qué tiñen: Se unen principalmente al DNA y RNA localizados en el núcleo de las células.

• Ejemplos: Azul de metileno y, el más prominente, la Hematoxilina.

• Hematoxilina: Aunque es un compuesto neutro, se utiliza con un mordente metálico que le otorga propiedades básicas, tiñendo los núcleos celulares de azul o púrpura.

2. Tinciones Ácidas (Aniones)

Estos colorantes poseen una carga global negativa y se unen a componentes del tejido que son básicos o tienen carga positiva (estructuras acidófilas).

• Qué tiñen: Proteínas de la matriz extracelular y el citoplasma celular.

• Ejemplo principal: La Eosina, que confiere una coloración rosa a estos componentes.

3. Combinación Hematoxilina y Eosina (H&E)

Es la técnica más común y utiliza ambos tipos de colorantes en secuencia.

• Resultado: Los núcleos se visualizan azules/púrpura (por la hematoxilina) y el citoplasma y fibras en tonos rosa (por la eosina).

4. Tricrómico de Mallory

Esta técnica utiliza una combinación de tres colorantes para diferenciar tipos específicos de tejidos.

• Fibras musculares: Se tiñen de rojo.

• Colágeno y tejidos conjuntivos: Se tiñen de azul o verde.

• Citoplasma de las células: Se tiñe de naranja o amarillo.

5. Impregnación por Metales

Es una técnica especializada que utiliza sales metálicas para marcar estructuras que no se visualizan bien con tinciones convencionales.

• Qué tiñen: Es muy utilizada para resaltar neuronas, fibras reticulares y estructuras específicas del cerebro como la sustancia negra.

• Mecanismo: Los sales (frecuentemente de plata) precipitan sobre las estructuras, aumentándoles el contraste.

6. Otros Colorantes

• Magenta: Es un colorante ácido que se utiliza para ofrecer un contraste distinto cuando se combina con colorantes básicos como la hematoxilina.

• Solución de Bouin: Aunque es un fijador, se menciona que es excelente para preparar el tejido para coloraciones específicas como la tricrómica.

La elección de cualquiera de estos métodos depende estrictamente de la estructura específica que el investigador desee resaltar y de la información química o fisiológica que se busque obtener del tejido

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Paso a Paso del Procedimiento Histológico

El proceso completo se divide en tres fases críticas según las fuentes:

1. Fijación

Se realiza inmediatamente después de obtener la muestra para preservar la arquitectura celular y detener el metabolismo.

• Solución común: Formalina (forma enlaces cruzados en proteínas).

• Otras opciones: Glutaraldeído (para microscopía electrónica), Alcohol etílico (preserva lípidos) o Solución de Bouin (para estructuras delicadas).

2. Inclusión (Preparación para el corte)

Este proceso permite que el tejido sea lo suficientemente firme para ser cortado.

• Lavado: Se elimina el fijador residual.

• Deshidratación: Baños en concentraciones crecientes de alcohol para eliminar el agua.

• Clarificación: Se sustituye el alcohol por un solvente como xilol o tolueno, haciendo el tejido transparente.

• Embebiendo en Parafina: Infiltración con parafina líquida que luego se enfría para formar un bloque sólido.

• Corte: Uso del micrótomo para obtener secciones finas de entre 4 a 10 micrómetros.

• Montaje: Las secciones se flotan en agua caliente y se recogen en una lámina de vidrio.

3. Técnica de Coloración (Ejemplo H&E)

Para que el colorante penetre, se deben revertir algunos pasos de la inclusión:

1. Inmersión en Xilol: Elimina la parafina del tejido.

2. Rehidratación: Pasaje por baños de alcohol en concentraciones decrecientes hasta llegar al agua.

3. Hematoxilina: Aplicación del colorante para teñir los núcleos.

4. Lavado: Eliminación del exceso de colorante.

5. Eosina: Aplicación del colorante para teñir el citoplasma.

6. Deshidratación y Limpieza: Se elimina el agua nuevamente y se limpia con xilol.

7. Sellado (Montaje final): Se coloca un cubreobjetos para proteger la muestra para su análisis