ELETROFORESE

ELETROFORESE

1. EM GEL DE AGAROSE

   • A migração ocorre em suportes horizontais
   • Utilizada para separação de fragmentos de DNA e RNA
   • Separa de acordo com a quantidade de pares de base (Pb) e carga
   • Gel composto por agarose em pó e solução tampão TAE ou TBE
   • MATERIAIS UTILIZADOS
     • Gel de agarose
     • Cuba eletroforética horizontal
     • Pipetas semi-automáticas
     • Fonte para eletroforese
     • Tampão de corrida
     • Suportes e pentes
     • Microondas
     • Balança de precisão
     • Ladder-Kb

2. CONCEITO

   • É uma técnica de separação de biomoléculas (DNA, RNA e proteínas) baseada no seu tamanho e carga em um GEL.
   • Empregada pela primeira vez em 1937 por Arne Tisélius

3. FUNÇÃO

   • Biomoléculas possuem carga, portanto, estas são submetidas a um sistema de polos negativo e positivo, aplicando-se uma corrente elétrica. De acordo com sua carga, a molécula migrará para um dos polos. Se a sua carga for negativa, migrará para o polo positivo.
   • Moléculas maiores percorrerão menores distâncias por terem mais dificuldade de passar através do gel, enquanto moléculas menores percorrerão maiores distâncias, pois elas tem mais facilidade.
   • Baseia-se na migração de moléculas com cargas, que migram para os polos (negativo ou positivo) em um sistema em que foi submetido um potencial elétrico.
   • Os géis são uma espécie de malha com poros, que prendem as moléculas durante a migração. As moléculas de menores tamanhos terão maior facilidade de passar por eles e as maiores, mais dificuldade
   • O tamanho das moléculas, ao final da migração, são reconhecidos comparando com marcadores, moléculas de tamanhos específicos já conhecidos.
   • Para saber onde as moléculas estão e suas distâncias percorridas, é adicionado um corante que fará com que as moléculas 'brilhem" quando expostas à luz UV.

4. EM GEL DE POLIACRILAMIDA

   • Amplamente utilizada para separação de proteínas
   • A migração ocorre em suportes verticais
   • Separa de acordo com a massa molecular (M.M) e carga
   • MATERIAIS UTLIZADOS
     • Cuba eletroforética vertical
     • Placas de vidro
     • Separadores
     • Grampos e pentes
     • Pipetas semi-automáticas
     • Acrilamida 40%, APS 10%, TMED, TBE 10X
       • Se faz 2 Géis de poliacrialmida
         • Gel de corrida (poliacrilamida 8% a 20%)
         • Gel de empacotamento (poliacrilamida 5%)
     • Tampão de corrida

5. IMPORTÂNCIA

   • Papel importante em análises laboratóriais
   • Auxilia estudos forenses
   • Grande importância em elaborações de pesquisas científicas