EXTRACCIÓN DE ADN

EXTRACCIÓN DE ADN

1. INTRODUCCIÓN

   • Moléculas con información genética
     • Funcionamiento orgánico
     • Estructura molecular
       • • Aislar cadenas de ADN
           • • Primidinas
               • Citosina
               • Timina
             • Purinas
               • Adenina
               • Guanina

2. MATERIALES (Estudiante)

   • Muestra vegetal o animal
   • Batidora o picadora
   • Cloruro de sodio
     • • Atracción de cargas (Soluble en agua)
   • Detergente liquido o shampoo
     • • Disuelve (Lípidos)
       • Separa (Proteinas rodeando el ADN)
   • Colador
   • Ablanda carnes o zumos de piña o papaya

3. MATERIALES (Docente)

   • Agua destilada o mineral
   • Bicarbonato sodico
   • Varilla fina
   • Tubos de ensayo
   • Vaso de precipitados
   • Pipeta de 10 ml
   • Alcohol isoamilico y etilico a 0°
   • Nevera

4. Desarrollo de la práctica

   • Método 1
     • 1.Disolver 5g de NaCl en H2O
       • 2. Pesar 250g de material vegetal o animal
         • Impulsos hasta obtener macerado (10')
         • 3. Filtrar macerado
           • 4. Agregarlo a solución salina fria
             • Añadir 30 ml detergente y reposo (5min)
             • 5. Añadir a tubo de ensayo mezcla (10ml)
               • Añadir 0.5g de Ablandador y agitar
               • 6. Tubo inclinad, añadir alcohol isoamílico (10ml)
                 • Reposo (5min)
                 • 7. Observar fragmentos de ADN enrollados (mayor tamaño)
   • Método 2
     • 1. Preparar solución buffer
       • - 120ml agua destilada - 1.5g NaCl - 5ml NaHCO3 -5ml detergente
       • 2. Cortar muestra que proporciona ADN
         • Trituralrla (impulsos=10')
         • 3. Mezclar: 20ml triturado celular - 40ml buffer frio
           • Agitar fuertemente (2min) y filtrar restos vegetales
           • 4. Agregar: 0.5g ablandador
             • 5. 10ml de mezcla obtenida y depositar en tubo de ensayo
               • Tubo inclinado: añadir 10ml alcohol isoamílico
               • 6. Observar fragmentos de ADN enrrollados (mayor tamaño)
   • Método 3
     • 1. Mezclar; 1.5g NaCl - 5g NaHCO3 - 120ml Agua - 5ml Detergente
       • Mantenerlo frio
       • 2. Transferir 15ml de solución a tubo de ensayo
         • Escupir 10 veces en sobre ella y mezclar
         • 3. Tubo inclinado: Añadir 15ml alcohol isoamilico
           • 4. Observar fragmentos de mayor tamaño de ADN enrrollados
   • Método 4
     • 1. Vaso de agua: Disolver una cucharadita de NaCl y 3g Detergente
       • 2. Agregar a la solución trozos de la parte central de cebolla
         • 3. Adicionar mezcla a licuadora y accionar (30')
           • 4. Obtener extracto y agregarlo a un tubo (1/4)
             • 5. Añadir zumo de piña y mezclar
               • 6. Agregar mismo volumen de alcohol
                 • 7. Dejar reposar hasta que forme zona turbia entre ambas capas
                   • 8. Extraer fibras blancas de ADN
   • Método Alternativo (Tinción de Feulgen)
     • 1. Desnaturalización de la cadena
       • Separa purinas de las desoxirribosas (ADN)
     • 2. Colocar muestra en portaobjetos e hidratar
     • 3. Secar (1min)
       • 4. Aplicar reactivo Feulgen
     • 5. Observar coloración

5. Preguntas

   • 1. Reactivos
     • Solución Buffer
       • Protege información genética (efecto tampón)
     • Alcohol
       • Purifica
     • Detergente
       • Rompe membranas (Disuelve lípidos - Separa proteínas)
   • 2. Tampón de solución
     • Mantener el pH estable
     • Solución amortiguadora
   • 3. Efecto del Alcohol
     • Purificación
     • Deshidratación

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