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HIDRÓLISIS DE UNA PROTEÍNA Y ENSAYOS PARA PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS

matraz balón (200ml)

1 g de grenetina, 10ml de HCl, 10ml de H2O destilada

adaptar refrigerante (posición de reflujo)

calentar (35min)

agregar 0.5 g de carbón activado

PREPARACIÓN DE DISOLUCIONES

HIDRÓLISIS DE GRENETINA (A)

calentar (2min) y filtrar

NEUTRALIZACIÓN DE HIDRÓLIZADO DE GRENETINA (B)*

GRENETINA SIN HIDRÓLIZAR (C)

tomar 5 mL dela disolución anterior

neutralizarla con NaOH al 10%

filtrar

vaso de pp (100ml)

0.5 g de grenetina,, 20 ml de H2O destilada

agitar

DISOLUCIÓN DE ALBÚMINA (D)

agitar clara de huevo (10 seg)

agregar 100 ml de H2O

agitar y filtrar

REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN

REACCIÓN XANTOPROTEÍCA

tubo de ensayo (2ml) con disolución A

tubo de ensayo (2ml) con disolución D

agregar 5ml de ác. nítrico conc.

Calentar a baño María (observar)

Enfriar y agregar disolución de NaOH al 10% (hasta pH básico)

Observar cambio de color

REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN

tubo de ensayo (2ml) con disolución A

tubo de ensayo (2ml) con disolución D

tubo de ensayo con 2ml de H20 destilada

Agregar 5ml de disolución de NaOH al 10% y 1.0ml de

disolución de acetato de plomo al 10%.

Calentar a ebullición con agitación (5min) y observar

REACCIÓN DE BIURET

tubo 1: H2O destilada y sol. de NaOH al 10% (0.5ml de c/una)

tubo 2: disol. C y NaOH al 10% (0.5ml de c/una)

tubo 3: disol. D (0.5ml)

tubo 6: disol. A (0.5ml)

tubo 4: disol. A y NaOH al 10% (0.5ml de c/una)

tubo 5: disol. D y NaOH al 10% (0.5ml de c/una)

agregar 2 ml de disol. de sulfato de cobre al 2 %.

agitar, observar y

concluir

REACCIÓN CON NINHIDRINA

tubo 1: H2O destilada (0.5ml)

tubo 2: disol. B a pH neutro (0.5ml)

tubo 3: disol. C (0.5ml)

tubo 4: disol. D (0.5ml)

tubo 5: disol. al 1% de un aminoácido(0.5ml)

agregar 0.5ml de disol. de ninhidrina al 3%

calentar a baño María (5min)

observar y concluir

REACCIÓN CON ÁCIDO NITROSO

ACCIÓN REGULADORA DE AMINOÁCIDOS

tubo 1: 3ml de HCl y 2ml de disol. A

tubo 2: 3ml de HCl y 2ml de disol. C

tubo 3: 3ml de HCl y 2ml de disol. D

tubo 4: 3ml de HCl (testigo)

enfriar

agregar 1ml de disol. acuosa de nitrito de

sodio al 5%

observar y concluir

tubo 1: 2ml de disol. B a pH neutro

tubo 2: 2ml de H2O destilada

agregar 0.3ml de indicadora de rojo congo y HCl 0.1N

observar y concluir

efectuar mismo ensayo con fenoftaleina al 0.1% y NaOH 0.1N

CROMATOGRAFÍA EN PLACA FINA

aplicar muestra de la disol. B (neutra) en una cromatoplaca

hacer aplicaciones de aminoácidos patrón

secar cromatograma e introducirlo en la cámara de cromatografía con

mezcla de acetato de etilo-agua 7:3

eluir el cromatograma

Secar en estufa y revelar con un atomizador (con disol. de ninhidrina

identificar aminoácidos presentes con valores de R.f.

realice las anotaciones correspondientes