Metodologia Convencional de Salmonella

Metodología Convencional para Salmonella

Etapa analítica

Etapa pre-analítica

Etapa post-analítica

Colección de muestra

Transporte

Contenedor isotérmico previamente enfriado, la temperatura tiene que mantenerse de 4-8°C.

Asépticamente Uso de guantes Cubrebocas Utensilios estériles

Embalaje: Frasco de boca ancha o bolsa Stomacher estéril.

Datos: fecha de toma de muestra, lugar de origen, tipo y numero de muestras, lugar de destino (nombre y dirección del laboratorio receptor) y análisis requeridos.

Coloque 25g de muestra en frasco. Agregar 225mL de caldo lactosa estéril y diluir completamente

Preparación de la muestra

Aflojar la tapa a 1/4 de vuelta e incubar durante 24h ± 2h a 36 °C ± 1 °C.

Transferir 0.1mL del cultivo de pre-enriquecimiento a un tubo del 10mL de caldo RVS y 1mL a un tubo conteniendo 10mL de caldo MKTTn.

Incubar el caldo RVS a 41.5 °C ± 1 °C por 24h ± 3h y el caldo MKTTn a 36 °C ± 1 °C por 24h ± 3h.

Aislamiento e identificación

Agar XLD para el aislamiento de colonias típicas.

ASB para aislamiento de colonias lactosa positivas

Medio de cultivo complementario ej. Agar Verde Brillante.

Colonias incoloras rosadas o fiusha, transparentes u opacas.

Colonias rosas con o sin centro negro.

Colonias cafés, grises o negras.

serología

Detección de los antígenos Poly A-I & Vi

Empleando una colonia pura no autoaglutinable, proceda, empleando una gota de la solución salina en una lámina de vidrio, disperse con el asa hasta obtener una suspensión homogénea y agregue una gota del antisuero O.

Si se produce aglutinación, la reacción se considera positiva.

Pruebas bioquímicas

A partir del agar nutritivo, con un asa recta estéril, tocar ligeramente el centro de la colonia seleccionada e inocular en tubos de agar inclinado de TSI y LIA.

Las colonias típicas de Salmonella spp, producen alcalinidad (color rojo) en la parte inclinada del medio y ácido (color amarillo) en el fondo;

En LIA, Salmonella spp produce reacción alcalina (color púrpura) considerar como negativos los cultivos que produzcan claramente un color amarillo en el fondo del tubo.

Producción de gas y cerca del 90% de los casos producen H2S

Seleccionar las placas que contienen menos de 150 UFC típicas, no mas de 300 UFC tipias y no tipicas.

Calcular N, como el número de UFC de Salmonella spp positiva, presente en la muestra por mL o g, como la media de dos diluciones sucesivas utilizando la siguiente ecuación:

N = Ea .

V(n1 + 0.1 n2) d

Reporte

Los cultivos determinados como presuntivos con las pruebas bioquímicas y confirmados por la serología, informar como:

Salmonella spp en 25g: PRESENCIA.

Placas con agar XLD, ASB y el tercer medio selectivo sin desarrollo y/o colonias atípicas, informar:

Salmonella spp en 25g: AUSENCIA.