Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus

Medios y reactivos

- Medio Baird-Parker- Tripticasa (tríptico) de agar de soja (TSA)

- De infusión de cerebro y corazón (BHI)

- plasma coagulasa (conejo) con EDTA

- Toluidina azul agar-ADN

- Triptona, extracto de levadura de agar

-Prueba de la catalasa

Equipos y materiales

- Equipamiento básico mismos que para recuento en placa convencional.

- Armario de secado o incubadora de superficie de secado de las placas de agar.

- Estériles varillas dobladas que rayan el vidrio, palo de hockey o en forma de azada, con extremos pulida al fuego, de 3-4 mm de diámetro, de 15-20 cm de largo, con una superficie de dispersión de ángulo de 45-55 mm de largo

PROCEDIMIENTO

Para cada dilución a ser plateado, la transferencia asépticamente 1 ml de muestra en suspensión de 3 placas de agar Baird-Parker, distribuir 1 ml de inóculo de manera equitativa a 3 placas

Difundir el inóculo sobre la superficie de la placa de agar, utilizando varilla de vidrio doblado rayas estéril.

Conservar las placas en posición vertical hasta que el inóculo es absorbido por el agar (unos 10 minutos en placas adecuadamente secas)

Si inóculo no se adsorbe fácilmente, placas en posición vertical en lugar incubadora durante aproximadamente 1 h. Invertir las placas e incubar 45-48 horas a 35-37 ° C.

Seleccione placas que contienen 20-200 colonias, a no ser que sólo las placas en diluciones inferiores (> 200 colonias) tienen colonias con aspecto típico de S . aureus .

Contar y colonias de registro.

Seleccionar> 1 colonia de cada tipo se contaron y se prueba para la producción de coagulasa

Añadir número de colonias en placas por triplicado representados por las colonias que dan prueba de coagulasa positiva y se multiplican por el factor de dilución de la muestra.

METODOS

Prueba de coagulasa

1- Transferir sospechoso S . aureus colonias en tubos pequeños que contienen caldo BHI 0,2 a 0,3 ml y emulsionar a fondo. Inocular agar inclinado de medio adecuado de mantenimiento, por ejemplo, la TSA, con asa de siembra de suspensión BHI. Incubar suspensión de cultivo BHI y tubos inclinados de 18-24 horas a 35-37 ° C.

2- Añadir 0,5 ml de plasma reconstituido coagulasa con EDTA, Incubar a 35-37 ° C y comprobar periódicamente durante 6 h periodo de formación del coágulo. Sólo coágulo firme y completa que se mantiene en su lugar cuando el tubo está inclinada o invertida se considera positiva paraS . aureus .

3- Teñir todas las culturas sospechosos con el reactivo de Gram y observar al microscopio.

Prueba de la catalasa.

Utilizar el crecimiento de TSA inclinación para la prueba de catalasa en portaobjetos de vidrio o una placa de comer, e iluminar adecuadamente para observar la producción de burbujas de gas.

Número Más Probable para Staphylococcus spp

Se recomienda el método del número más probable (NMP) para la vigilancia rutinaria de productos en los que un pequeño número de S . aureus se espera y en los alimentos previstos para contener una gran población de especies competidoras.

BLIBLIOGRAFIA

AOAC International. 1995. Métodos Oficiales de Análisis, 16ª ed., Sec. 975.55. AOAC International, Arlington, VA

Bennett, RW, M. Yeterian, W. Smith, CM Coles, M. Sassaman, y FD McClure. 1986. Staphylococcus aureus características de identificación y enterotoxigenicidad. J. Sci Food. 51 : 1337-1339.

- Sperber, WH, y SR Tatini. 1975. Interpretación de la prueba de coagulasa en tubo para la identificación de Staphylococcus aureus . Appl. Microbiol. 29 : 502-505.

- ( RECUPERADO DE: http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm071429.htm )

INTEGRANTES

Robles Prieto Jessica Esmeralda

Chávez Preciado Maria del Rosario