ETAPAS METODOLOGICAS SEGUN USDA / FSIS

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• ETAPAS METODOLOGICAS SEGUN USDA & FSIS 

• 1) ENRIQUECIMIENTO 

• 2) TAMIZAJE 

• 3) SEPARACION INMUNOGENETICA 

• 4) IDENTIFICACION FENOTIPICA Y SEROTIPICA 

• 5) CARACTERIZACION MOLECULAR 

• Tipo de muestra 

• Carne molida y embutidos 

• Esponjados de medias reces 

• Colocar en caldo de enriquecimiento 

• Kit: RapidChek E. coli O157  

• Se aplico a todas las muestras 

• Utilizaron 

• Perlas inmunomagneticas [100 ul]

•       Se sembraron        [50 ul ] en: 

• Agar MacConkey           Sorbitol            + Cefixima- telurito 

• Agar CHROM 

• Incubar a 37 ° C / 24 h 

• Bioquimica 

• 1) fermentación de celobiosa

• 2) crecimiento en cianuro de potasio

• 3)  producción de pigmento y de lisina descarboxilasa

• Biotipo

• 4) Movilidad: realizó en medio de Craigie

• Fermentación de sorbitol, dulcitol, rafinosa y ramnosa

• Serotipificación

• se realizó con los antisueros somáticos O157 y flagelar H7

• caracterizados por PCR múltiple

• Subtipificación: la variante de la toxina Shiga

• Electroforesis en campo pulsado (XbaI-PFGE) utilizando el protocolo  PulseNet para E. coli O157

• Análisis de los patrones electroforéticos se utilizo  Bionumerics Software    Package 4.0

• Comparacion de cepas STEC  O157 se utilizó la base de datos de PulseNet Argentina