ETAPAS METODOLOGICAS SEGUN USDA / FSIS

ETAPAS METODOLOGICAS SEGUN USDA & FSIS

1) ENRIQUECIMIENTO

2) TAMIZAJE

3) SEPARACION INMUNOGENETICA

4) IDENTIFICACION FENOTIPICA Y SEROTIPICA

5) CARACTERIZACION MOLECULAR

Tipo de muestra

Carne molida y embutidos

Esponjados de medias reces

Colocar en caldo de enriquecimiento

Kit: RapidChek E. coli O157

Se aplico a todas las muestras

Utilizaron

Perlas inmunomagneticas [100 ul]

Se sembraron [50 ul ] en:

Agar MacConkey Sorbitol +

Cefixima- telurito

Agar CHROM

Incubar a 37 ° C / 24 h

Bioquimica

1) fermentación de celobiosa

2) crecimiento en cianuro

de potasio

3) producción de pigmento y de lisina descarboxilasa

Biotipo

4) Movilidad: realizó en medio de Craigie

Fermentación de sorbitol,

dulcitol, rafinosa y ramnosa

Serotipificación

se realizó con los antisueros

somáticos O157 y flagelar

H7

caracterizados por PCR múltiple

Subtipificación: la variante de la toxina Shiga

Electroforesis en campo pulsado (XbaI-PFGE) utilizando el protocolo PulseNet para E. coli O157

Análisis de los patrones electroforéticos se utilizo Bionumerics Software

Package

4.0

Comparacion de cepas STEC O157 se utilizó la base de datos de

PulseNet Argentina