MICROSCOPIA

MICROSCOPIA

1. Microscopia óptica

   • Luz percorre um trajeto
     • Observador ← Lente ocular ← Lente objetiva ← Lente condensadora ← Luz
   • Há uma variedade de microscópios de luz
     • Microscópio confocal
       • Utiliza luz laser
         • Define imagem fluorescente
     • Microscópio de contraste de fase
       • Converte diferenças do índice de refração ice de refração que não podem ser vistas, em diferenças de intensidade visíveis
       • Permite visualizar células vivas descoradas
     • Microscópio de fluorescência
       • Luz atinge objeto corado com fluorocromo que absorve a luz fluorescente e emite luz em outra coloração (outro comprimento de onda)
     • Microscópio ultravioleta
       • Utiliza luz UV (comprimentos de onda de 180 a 400 nm)
         • Dobro da imagem ampliada comparada com a imagem utilizando luz branca
     • Microscopia de campo escuro
       • Apenas alguns raios de luz que foram refratados ou dispersados pela amostra chegam até a lente
         • Forma figuras luminosas em um fundo escuro
     • Microscopia de campo claro
       • Quando luz passa através da amostra fazendo com que a imagem seja bem iluminada
       • Utilizado para maioria das pesquisas e estudos em laboratórios

2. Microscopia eletrônica

   • Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV)
     • Utiliza lentes eletromagnéticas e feixe de elétrons sobre amostra analisada
       • Alta resolução e ampliação
   • Microscópio Eletrônico de Transmissão (MET)
     • Feixe de elétrons é emitido através de uma amostra ultrafina
       • Alta resolução e ampliação

3. Microscópio simples

   • Ampliação de 10x até 125x
   • Imagem direta e em 3 dimensões
   • Amplo campo de visualização
   • Ampla profundidade de foco
   • 1 sistema de lente convergente

4. Microscópio composto

   • Tem 2 sistemas de lentes convergentes
     • Ocular
       • Aumento
     • Objetivas
       • Aumento e limite de resolução
   • Tem sistema de luz
   • Imagem ampliada, invertida e virtual
   • Ampliação pode chegar a 1000x ou até 5000x

5. LIMITE DE RESOLUÇÃO (LR)

   • Capacidade de um sistema em distinguir entre objetos muito próximos
     • Quanto menor LR, maior a capacidade de diferenciar o limite entre 2 pontos
       • Quanto menor o LR, melhor a resolução da imagem
         • É possível ajustar o limite de resolução por meio do cálculo:
           • d= 0,61.λ/NA
             • ↑ Comprimento de ondas (λ) → ↑ Limite de resolução (d)
             • ↓ Comprimento de ondas (λ) → ↓ Limite de resolução (d)
             • ↑ Abertura numérica (NA) → ↓ Limite de resolução (d)
             • ↓ Abertura numérica (NA) → ↑ Limite de resolução (d)
   • É limitado pela natureza de onda de luz
     • Luz ultravioleta (~400nm) < Luz branca
   • LR do olho humano: ~0,1 a 0,2 mm
   • LR do microscópio de luz: ~200 nm
   • LR do microscópio eletrônico de varredura: ~1 a 3 nm
   • LR do microscópio eletrônico de transmissão: ~0,2 a 0,4 nm
   • Abertura numérica e profundidade de campo
     • Abertura numérica da lente objetiva interfere na abertura do ângulo
       • ↑ Abertura numérica
         • ↑ Abertura do ângulo
           • ↓ Distância entre lente e lâmina
             • ↑ Tamanho da imagem
   • Índices de refração podem alterar o LR
     • Cada material tem um determinado índice de refração
       • Índice de refração do óleo de imersão: 1,51 > 1 (ar)
         • Óleo de imersão: raios de luz não-refratados penetram na lente
           • ↑ Índice de refração → ↓ LR

6. O primeiro microscópio

   • Leeuwenhoek aperfeiçoou o instrumento observou seres vivos
   • Lente com aumento de cerca de 270x

7. Cada microscópio tem uma especificidade

   • Lentes de plano acromáticas
     • Menores aberturas numéricas
   • Lentes planto fluorita
   • Lentes plano apocromáticas
     • Maiores aberturas numéricas

8. Efeitos da difração da luz em sistemas ópticos podem causar aberrações:

   • Aberração esférica
   • Aberração cromática