RFLP- Verfahren

RFLP- Verfahren

1. Bedeutung/ Geschichte

   • Veranschaulichung der unterschiedlichen Längen von wiederholenden DNA- Abschnitten
     • Verfahren von Alec Jeffrey im Jahre 1985 entwickelt

2. Durchführung

   • Vorprozedur
     • Isolierung DNA
       • Erkennung von Bausteinsequenzen, und Ausschneidung aus DNA
         • VTNR Abschnitte besitzen bestimmte Basenfolge eingerahmz und dadurch Erkennung "Schneideenzyme"
     • Längenordnung der DNA Fragmente/ Gel- Elektrophrorese
       • Agarose- Gel in einem elektrischen Feld pipettiert
         • DNA- Stücke wandern zum Pluspol, da Phosphat- Gruppe der DNA = negativ
           • Fragmente variieren in Geschwindigkeit und Masse
             • Je kürzer + leichter, desto schneller
               • Denaturierung
                 • DNA- Stücke werden durch Erhitzung + Zugabe von Lauge zu Einzelsträngen aufgespalten
                   • Fixierung
                     • Stabilität + Positionbewahrung durch "Southern-Blot"
                       • Enzelstränge auf Nylon- Membran übertragen und durch wärme fixiert
                         • Hybridisierung
                           • Bandenmuster durch DNA- Sonde sichtbar gemacht
                             • DNA- Sonden bestehen aus Enzym oder radioaktiv- makiertem
                               • Sind komplementär auf Nylon- Membran liegende DNA- Fragmente
                                 • Fragmente leuchten schwach auf