Flashcards
Técnica de Gram
Cards in this deck (18)
- 1¿Qué es un frotis?Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o
cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen
agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. - 2Menciona el procedimiento para preparar el frotisColocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Se necesita muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta
suficiente. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una colonia del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de
siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para
facilitar su secado.
Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos
primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.
Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la
llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.
Fijación de las bacterias al portaobjetos - 3Menciona el procedimiento de fijación del frotisPor calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejar
enfriar el porta entre los pases.
Con metanol (para bacterias procedentes de medio líquido). Añadir unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca. Golpear el portaobjetos por su canto con
cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol. Esperar a que el metanol se evapore completamente.
Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser observadas al microscopio a 100x, aunque carecen de contraste. - 4¿Qué tipos de tinción hay?Tinción simple o sencilla y técnica de Gram o diferencial
- 5¿Para qué sirve la tinción de Gram?Para identificar ciertas estructuras especificas o la filogenia
- 6¿Qué colorantes se utilizan para la tinción diferencial?Cristal violeta (primer colorante) y azafranina
- 7¿Qué principio químico utilizan los colorantes?Si el colorante es ácido, podrá teñir estructuras básicas.
Si el colorante es básico, podrá teñir estructuras ácidas.
O pueden haber colorantes polares - 8¿Cuál Mordente se usa en tinción de Gram y qué hace?Hace un complejo con colorante y es lugol
- 9Tinción de Gram Paso 1-.Una vez preparado el frotis, colocar el cristal violeta y dejarlo por 1 minuto
- 10Tinción de Gram Paso 2-.Se enjuaga el frotis y después se le añade el Mordente de yodo para fijar el colorante en la pared celular
- 11Tinción de Gram Paso 3-.Se enjuaga el mordente y se le deja la solución etanol-acetona por 30 segundos para posteriormente eliminarla con agua
- 12Tinción de Gram Paso 4-.Agregar el colorante de contraste de azafranina
- 13Tinción de Gram Paso 5-.Quitar la azafranina con agua y dejar secar la muestra al aire
- 14¿Qué medidas hay que seguir para realizar la técnica de Gram?Colocar los colorantes utilizados en un contenedor de residuos, no es necesario usar guantes y es necesario observar la muestra a 100x
- 15¿Cómo funciona la técnica en la pared celular?El colorante primario se queda fijo en la pared celular, y en las gramnegativas la azafranina no puede retener al cristal violeta, lo que le da el color rosa.
- 16¿Que hace químicamente la tinción de Gram en bacterias grampositivas y gramnegativas?El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto gram positivas como gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo, y actúa de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
- 17Ficha 2 pregunta anteriorLa mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos gram positivos no se decoloran, mientras que los gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células gram negativas son rojas, mientras que las gram positivas permanecen violetas. - 18ficha 3El colorante básico entra al microorganismo, donde forma con el yodo una laca insoluble en agua. El alcohol o la acetona empleados para aclarar, deshidrata las paredes de los microorganismos gram positivos, tratados con mordiente, y forma una barrera que la laca no puede atravesar. En las células gram negativas, los lípidos de la pared (más abundantes que en las células gram positivas) se disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape del complejo de cristal violeta con yodo. Algunos autores objetan esta teoría, pero es indudable la importancia general de la pared celular.
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- Preparación de frotis y técnica de gram
- Created by
- Natalia Herrera Gonzalez
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