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VECTORES CLONACIÓN
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- 1Las bibliotecas génicas o de cDNA contienenrepresentaciones de los miles de
genes y fragmentos de DNA de la muestra de partida generados tras su restricción - 2Para clonar propiamente y poder analizar el DNA de interés, es necesario identificarlo en dicha biblioteca. Ello se consigue-..rastreándola mediante el uso de sondas o anticuerpos específicos que reconozcan secuencias presentes o
proteínas expresadas por la biblioteca - 3LA PCR es un aclonación de clase si fuese en una bacterai sería..in vitro
in vivo - 4La ingenieria genetica es la tecnolofia demanipulación y transferencia de ADN de un orgnaimos a otro para crear nuevas especies, corregir defectos geneticos y fabricar numerosos compuestos de interes
- 5pcr sustityoe a la clonación clasica?no, pero es más rapida
En muchas
ocasiones, ambas estrategias se complementan
puede ser interesante clonar in vivo un fragmento de DNA amplificado mediante PCR para estudiar su expresión génica bajo condiciones controladas - 6que es el inserto?el framenteo de adn que se mete en otro para copiarlo
- 7que es el vector?el adn donde se aljoa el inserto
puede replicarse de manera autónoma e
independiente del genoma de la célula hospedera - 8tipos de adn que puede ser el insertoi?ADN genómico
(ADNg),
ADN complementario (ADNc),
producto de la retrotranscipción del ARN
un producto de PCR
un ARN obtenido por transcripción in vitro. - 9que es el ADN recombinanteadn qu etiene unidos covalentemnte segmentos de ADN de diferentes fuentes
vamso, el inserto + vector - 10Procedimiento sgenerales de la clonacióncortar el ADN locazizadamente con endonucleasas de restricción
unir con ligasas los dos fragmentos de adn
seleeccionar un vector de clonación, una molecula de adn pequeña y autorreplicable
metodo de traslado del ADN desde el tubo de ensayo hasta dentro de una celula donde ser replicará
metodos para seleccionar las celulas que tienen el ADN recmombinante - 11Que son las endonucleasas de restricción?son tijeras moleculares.
enzimas que reconocen secuencias de 4-8 pb en el adn y l ohacen su diana o sitio de restricción (DEBE ESTAR NO-METILADA) - 12que implica que una secuencia de ADN esté metilada?que no está accesible para las enzimas de restricción
- 13Nomenclatura de la enzima de restriccion?3 letras en cursiva para el nombre cientifico del bicho
cepa o estirpe si la hay
numero romano si hay más de una endonucleasa
Bam HI
Eco R III - 14Com opueden cortar las endonuclasas? dejando extremos...romos o cohesivos
- 15Cuales son los vectores? en kb?Plasmidos normales (0-10)
bacteriofacos de inserción 0-10
bacteriofagos de sustituci´on 9-23
cosmidos 30-44
bacteriofagos 70-100
PACs (cromosomas artificailes de P1) 130-150
BACs ( cromosomas artificailes de bacteria) hasta 300 kb
YAC (cromosas artificiales de levafuda 0,2-1Megabases - 16caracteristidas de un vector de clonación? y recombiante?plasmidos 2 cadena de ADN extracormosomico
autorreplicable
tiene el inserto de interés. Es el vector recombiante - 17que es la transformación?cuando se mete el vector recombinante en la bacteria o celula
- 18Elemento de los plasmidos?origen de replicación para replicarse autonomamente
gen de resistencia a un antibiotico para detectar a la transformada
gen reportero en el plasmido. Premite corrobiar y visualizar la transcricpion del plasmido - 19que es la transfección?meter ADN exogenoe en celulas eucatiritas con plasmidos, vecotres viridos u otras herramientoas
- 20que es la transducción?es la transfección pero usando vectores viricos
- 21como pentra el plasmido en la celula?por electroporación
por liposoomas (lipidos cationicos) - 22que es un vecto de clonación? que elementos tienefinalidad: almacenar secuencias y obtener mucho ADN inserto o recombinante
plasmidos, fagos, fagémidos, comsidos y cromosomas artificiales
tiene:
-ORI
- Sitio multiplie de clonación (secuencia que es atacada por muchas enzimas de restricicón)
- marcador de selección - 23que es un sitio múltiple de clonación (SMC)una secuencia específica reconocida por diversas enzimas de restricción para poder insertar el ADNc del gen de interés
con una amplia gama de
posibilidades de insertar cualquier fragmento de ADN.
Los sitios de restricción más comunes son para las enzimas
EcoR I,
Hind III,
BamH I,
Xho I
Kpn I. - 24Que es un vector de expresión?objetivo es producir un transcrito ARN. EXPRESAR ARN o PROTEINA
Son plasmidos o fagos o cosmidos
busca generar proteina recombinante
tiene, ademasd e lo tipico:
- PROMOTOR
- SITIO IRIES
- SECUENCIA DE PLIADENILCAÓN - 25Que es el sitio IRIES de un vector de expresió?sitio de entrada interna al ribosoma
- 26elementos de los vectores de clonaciónOrigen de replicaicón
Mracador de selección
sitio de clonación multiple - 27que es el origen de replicación?secuencia en el ADN del vector que provee un sitio único de
reconocimiento a las proteínas que identifican el sitio de inicio de la replicación (ORI).
los plasmidos hacen replicación unidireccional - 28que es un marcador de selección?gen que generalmente confiere resistencia a un antibiótico o genera un
fenotipo particular con el cual puede seleccionarse la célula que incorporó el vector
suelen ser unicos en los vectores
algunos pueden tener 2 - 29Como funciona el marcadode selección GEN LAC Z? y el (green fluorescente protein, GFPEstá el operón Lac de E. coli y codifica la enzima βgalactosidasa
βgalactosidasa se expres y genera la enzima que ataca al XGAL, que lo degrada y se genera un color azul
un marcador que es ese gen, que permite expresar una potinea verede fluorescente que hace que la celula emita fluorescencia si recibe UV - 30QUE es un marco abierto ed lecutra ORF?Este sitio suele formar parte
del marco abierto de lectura («ORF») de un gen responsable de alguna característica fenotípica, por lo que
resulta sencillo confirmar si tras la restricción y ligado se ha insertado efectivamente un fragmento de
ADN, ya que la inclusión de este interrumpe la secuencia del vector, lo cual redunda en la pérdida de
funcionalidad del gen mediante inactivación por inserció - 31De donde vienen los fagos?provienen de la modificación del genoma ADNds lineal de virus bacterianos.
- 32que son los cosmoids?combinan propiedades de los plásmidos con la presencia de los
sitios COS del fago. - 33que es un BAC? Que permite?Un BAC, o cromosoma bacteriano, permite la ligación de fragmentos grandes de ADN que contienen
secuencias de resistencia a antibióticos, y sitio de clonación múltiple. - 34que son los YACs? que permiten?Los YAC se construyen a partir de la ligación de fragmentos de ADN de gran tamaño con genomas de
levadura modificados que contienen genes de resistencia a antibióticos, secuencias teloméricas y de
codificación para centrómeros. - 35que significa episolmal?Los plásmidos permanecen de manera episomal en la bacteria, esto es, sin incorporarse en su
genoma, y en ella puede haber múltiples copias del mismo plásmido. - 36como se han manipulado los plasmidos para hacerlos vectores?preservar sólo las
características deseables, eliminar el ADN innecesario y añadirle otras que no poseen de forma natural.
son de 2-5 kb
hay mcuhos tipos de plasmidos, asi que hay mucha varibilidad para las enimzas de restrcción, longitud eel producto y los marcadores de selección - 37cuantos plasmidos hay por celula10-20
- 38que son los tra-genes de los plasmdiso congujativos?ejecutan complejos procesos de conjugación, como la
transferencia sexual de plásmidos a otra bacteria - 39tipos de plasmidos de bacterais que coexistene n las bacterias segun su capacidad de cunjugación?conjugativos
no conjugativos
mobilizables - 40Los plásmidos no-conjugativos, son incapaces deiniciar una conjugación, de allí que ellos pueden transferirse únicamente con la asistencia de los plásmidos
conjugativos y lo hacen “por accidente” - 41que son los plasmidos movilizables?llevan solo un subtipo de genes requeridos para la transferencia.
Ellos pueden “parasitar” un
plásmido conjugativo, transfiriéndose a una alta frecuencia solo en su presencia. - 42tipos de plasmidos segun su función?fertilidad (los tra-genes que pueden conjugarse)
resistencia (Factores R conocidos hasta ahora)
Col-plasmidos: genes que codifican (determinan la producción de) colinas y
proteínas que pueden matar a otra bacteria.
degradativos : habilitan la digestión de sustancias inusuales como tolueno o
ácido salicílico.
virulentos: lo hacen patogeno
(un plasmido puede estar en varios grupos) - 43Algunos plásmidos incluyen un sistema de adición o “Sistema de Muerte Postsegregacional” (PSK: Postsegregational Killing System), que es...generan un veneno de larga vida y un antidoto de cida corta.
las celulas que hereden este plasmido viven, y la que no, muere o se reproduce menos - 44propieades de los plasmidos como vectores?pequeños.
facil de manejar
ciruclares: estables
replicación independiente
puede habre multriples copias 1.000 a 3.000 copias de pBR322 por célula).
genes de resistencia
permite un tamaño de inserto consideble - 45limite del inserto para un plasmido?si son mayores de
10 kb, el plásmido se hace generalmente inestable - 46los plásmidos vectores de clonación generalmente han sido modificados a fin deevitar su
transferencia por conjugación y así lograr su contención biológica - 47que es la inactivación por insecciónel inserto se pone en medio de un gen que confiere resistencia
Si se inserta un trozo de un ADN en uno de estos sitios, la resistencia al
antibiótico conferida por el gen que contiene este sitio se pierde - 48que son los miniprep y el maxiprep?métodos de aislar ADN plasmídico de una bacteria,
El miniprep se suele usar desde una perspectiva analítica.10-30 microgramos , suficiente par aanalisar usando digestión restricitiva, secuenciación , etc
En el maxiprep, mas volumen de bacterias Esencialmente este
es un escalado de la preparación mini-prep, el cual es seguido por una purificación adicional. Esto resulta
en una cantidad relativamente grande (0,5 -1 mg) de ADN plásmido muy puro - 49Confromaciones de los plasmidso?superenrrollado o superespiral
superespiral desnaturalizado: tiene regiones sin unir que lo hacen ligeramente menos compacto;
circular relajado:
Lineal: cortado enzimaticamente o es su forma natural
Mellado abierto circular: el ADN tiene un solo corte filamentario. - 50La tasa de migración de pequeños fragmentos lineales es directamente proporcional alvoltaje aplicado para voltajes bajos
para voltajes altos grandes fragmentos migran continuamente a
diferentes tasas. - 51como varia la resoluciond e un gel con el voltaje?decrece con el incremento del voltaje.
- 52Como migra el ADN a voltaje bajo?un pequeño fragmento lineal de ADN esta en función de su
longitud
lineales largos (de 20kb) migran a cierta tasa sin importar la longitud. Esto es debido a que las moléculas “reptan” desde el centro de la molécula siguiendo el sentido de la matriz de gel. - 53Como se modifcia un fago para hacerlo vector?adición de sitios de restricción específicos
eliminación de aquellos
genes que no se requieren para la replicación - 54tamaño de los plasmidos de los bacteriofagos?(de hasta 23 kb).
- 55caracteristicas del fato lambda?mas usado como vector
adn lineal de 45kpb
2/3 de su genoma se puqede quitar
los extremos son 12 nucleotidos complemntarios entre si. Los sitios COS,q ue permiten CIRCUALIZAR el genoma con un aligasas
mapa genético complejo - 56que se conisgue con el fago lamnda?mediante empaquetamiento in vitro, se aseugra que todas las particuals viricas viables tendran el adn de interé
- 57porque no se usa el fago 1 silvestre para clonación? como se arregla?tiene muchos sitios de restricción.
se ceran modificados, los CHARON, que no tienen tanttos sitios de unioin - 58caracteristicas del fago m13filamentosos
adn monocatenario
replica sin matar
para usarlo hace falta una form bicatenaria - 59Como se consigue la forma bicatenria del fato M13?se puede obtener de celulas infectadas, donde se encuetnra la forma replicativa bicaternaia
- 60que es la zona de secuenica intergénica del fago m13?región que se puede usar como sitio de clonación, permitiendo clonar ahsta 5kb sin cargarse al fago
- 61Como usamos el poliinker y el BGALACTOSIDASA?El gen introducido interrumpe al gen LACZ y anula la Bgalactosidasa.
Cuando el XGAL se hidroliza por la enzima, se ve azul. Si no, se ve blanco
las colonias blancas son la que han tendio el adn clonado insertado en el polilinker
las celulas azlues no tienen el gen iserto - 62Tamaño de un cosmido? tamaño de clonación de los cosmidos? los del fato P1?son moleculas de adn pequeño 5-7kb
35-45kb
85 kb de ADN exógeno - 63que son los cosmidos?vectores híbridos del ADN de un plásmido (proporciona la resistencia a los antibióticos)
y los sitios cos del bacteriófago (le permiten empaquetar el ADN).
tienen: origen de replicaicónd e plasmido
uno o mas marcadores de selección
sitios de restrición
sitios cos ( - 64Como funcioan el sitio cos de los bacteriofagos y los cosmidos?El sitio cos es reconocido por el
sistema de empaquetamiento de ADN de λ, que hace cortes escalonados que originan los extremos
cohesivos complementarios en el cromosoma maduro del fago.
tienen asi la habilida de empaquetar in vitro el adn - 65que son los fasmidos?El sitio cos es reconocido por el
sistema de empaquetamiento de ADN de λ, que hace cortes escalonados que originan los extremos
cohesivos complementarios en el cromosoma maduro del fago.
tiene origen de replicaicón del fago y del plasmido - 66Como funciona el fasmido?una celula con un fasmido que se infecta con un fago silvestre va a tener de origen el orien del fago
generan copias monocatenariio que se empaqueta en viriones y se aisla para secuenciarlo - 67cual tiene mas capacidad de portar ADN? plasmido o fasmido?fásmidos pueden transportar de forma estable un fragmento de ADN clonado mayor
que un vector típico derivado de M13 - 68que son los cromosomas artificiales?permiten clonar grandes segmentos de cromosomas eucariotas en BAC y YACs
- 69utlidades de los cromosomas artificiales?útiles para
estudios de mapeo de cromosomas, por su capacidad para almacenar fragmentos de gran tamaño - 70De donde deriva el BAC? y el PAC?Deriva dun plasmido factor FF. Capaz de clonar fragmentos de 100-300kb
Deriva de un plasmido bacterial P1 - 71de que consta un BAC?ORI
Genes par del plasmido F, que facilita la distribución uniforme de los plasmidos entre celulas hijas
Cm r: gen de resistencia al clorafenicol
LacZ: gente que genera beta galactosiada - 72que es un YAC? que contiene? cuanto permite clonarCromosoma artificial
telomeros (2)
ori
centromero de levadura
marcador de selección
fragmentos de 100 a 1000 kb - 73como es la transforamción de lso cromosomas artificiales como los BAC?electroporación , por el tamaño
- 74como se hace la selección de los cromosoms artificiales?por lo del gen X-GAL. las transformadas son colonias blancas
- 75PAC y BAC vs los YAC?Pac acepta fragmentos menores de ADN
Son menos complejos y más faciles de construir
pueden amplificarse en bacterias
tiene menos insertos hibirdos , que entorpecen el ordenamiento de los clones - 76que son los insertos hibridos=insertos compuestos por dos o más fragmentos no
contiguos en el genoma - 77Por estos motivos los BAC han reemplazado a los YAC como vectores en laconstrucción de mapas físicos
de cromosomas enteros. - 78Como se hace la clonación en plantas?usando al parasito bacteriano AGORBACTERIUM TUMERFACINES que tiene un plasmido Ti (unductor de tumores), ahi se mete un adn foraneo
en plantas no se ha encontrado plasmidos naturales - 79Los vectores de expresión se emplean con dos finalidades:- generar el ARN producto de la transcripción
- producir la proteína codificada en la secuencia génica que portan (proteína recombinante). - 80que tipos de vectores se usan como vectores de explresión?plasmidos o bacteriofagos
- 81que compone un vector de expresión?ORI
Marcador de selección
sitio de clonación multiple
1 o mas promotores fuertes
secuencias de terminación de trasnciripción
secuencias de adición de poliadenilacion (para que el transcrito no se vea afectado por las nucleasas)
sistio de unión ribosomal (secuencia shine dalgano), que viene del codon de inico aAUG de la traducción en los ARNm procariotas - 82que caracteriza a un vector de expresión?son un sistema de inducción simple y efectivo
baja expresión basal
facil de transferir a otras cepas - 83A que es compatible la secuencia SHINEDALGARNO del stiio de unión de los vectores de expresión?Dicha secuencia es complementaria con el extremo 3’ del ARNr 16S, cuya
hibridación permite el ensamblaje de la maquinaria de inicio de la traducción - 84que es la expresión basal del plasmido? de que depende?número de copias del plásmido, característica
determinada por la fuerza del sitio de origen de replicación, que origina plásmidos con un elevado número
de copias per se - 85que celulas suelen ser las recpetoras paa clonar?ecoli y eucariotas a veces
- 86A la introducción de un vector a una célula eucariota se le denomina xxxxy si el vector es un virus, xxx la xxxx se refiere a la introducción de material genético a través de vectores a las bacterias;TrANFECCIÓN
transducción
transformación - 87pasos generales de la clonación?preparación del vector para clonación
preparación del inserto de ADN a clonar
ligación del inserto de ADN con el vector
la transformación de bacterias
la identificación de las colonias que
contienen el vector recombinante - 88eficiencia de una rotura de adn romo=la incorporación de un inserto con extremos romos implica una eficiencia de 50% en la clonación, ya que en la mitad de las ocasiones el inserto va en el sentido apropiado (5’-3’), pero
en el otro 50% de las ocasiones la inserción será en el sentido opuesto (3’-5’). - 89como se purirtifa la molecula clonada?mediante una electroforesis en gel.
- 90pasos para preparar el vector para una clonación?cortar e con la(s) misma(s) enzima(s) de restricción con que se digirió el inserto y obtener un ADN lineal con extremos de secuencias complemetnrias al inserto
desforoliacion del vector para que no se autoligue vector-vector. Se usa fosfatasa alcalina bovina intestinal o la fosfatasa bacteriana
purificar el vector: quitar agarosas, enzimas, sales, etc. Se usan columnas de resinas de alta afinidad al ADN con sales caotropicas
Tambien se puede purificar con fenol:cloroformo para adn plasmidico, pero lleva mucho tiempo y la calidad del adn es menor
ligar: se puede usar fragmentos largos de poimerasas para rellenar lso fragmentos cohesivos generados por una enzima y convertilos en romos - 91que se usa para desfosoriliar el vector?fosfatasa alcalina bovina de origen intestinal (CIP) o la fosfatasa bacteriana (BAP)
- 92en que consiste la ligación del vector-inserto? que ligasas se usan?involucra la formación de enlaces fosfodiéster
entre los residuos fosfato que se localizan en los extremos 5’ de la cadena de ADN y los residuos hidroxilo
3’
ligasa de E. coli
y la T4 ligasa de bacteriófagos - 93que es la generacion de celulas compentntes?adaptar una celula para que acepte un vector
suelen ser celulas procariotas (ecoli) - 94metodfos de hacer celulas competentes?solucion de CaCl2, nose sabe como funciona, pero l ohace + un breve chote termico de 42 grados por 90 segundos
electroopración, previo lavados 4 5 veces con glicerol al 10% (obtener células libres de iones y proteger a la membrana celular del
daño que ocasionará la electroporación por la cual se transformarán. ) - 95cuando se puede hacer a una celula competente?cuando esta en al fase logaritmica de crecimiento (OD entre 0,5 y 0,7) o densidad celular de 5 × 107 cel/mL)
- 96como se conservan las celulas competentas?as células pueden
almacenarse de forma indefinida sin perder su competencia en una solución acuosa con glicerol a 10%,
para impedir que al descongelarse se lisen. - 97efectividad de hacer competente por medio quimico?. La eficiencia de este método es de 1 × 104 a 1 × 106 células transformadas/µg de
plásmido, misma que varía dependiendo de la longitud del plásmido y la cepa de bacterias
utilizadas.
se puede aumentar con cationes divalentes como el rubidio y el manganseo - 98en que consiste la electroporación?aplicación de breves pulsos eléctricos de alto
voltaje (> 1500 V/5 ms) y generar poros en membrana y PC - 99efectividad de hacer competente por ELECTROPORAICO1 × 108 células
transformadas/µg de plásmido
es la mas eficiente
y la mejor opoción para plasmidos grandes
sirve para bacterias y eucariotas de alta proliferación, pero muchas mueres al no soportar el choque - 100que atnibioticos es suan en la detección de vectores recombinantes?os más utilizados son los genes de resistencia a antibióticos, como la ampicilina, la tetraciclina,
el cloramfenicol y la kanamicina - 101que es la transofrmaocion por transferencia con fosfato calcilo?se basa en la precipitación de adn exogeno e iones de calcio. Asi la celula, mediante endocitosis, incorpora el ADN
Bajae ficienci
no toxico
expresiónd e gen pequeña
solo se usa en cultivos celualres y exvivo - 102que es la transofrmaocion por liposomas?los liposomas son vesidulas huecas de lipidos.
puede meter adn de cualquier tipo por endocitosis
baja eficiencia de transfección
expresion transitoria
algo de toxicidad y celular
se puede inhibir por compoentes sericos - 103que es la transofrmaocion por microinyeccion?pinchar la celula para inyectar el material genetico
alta eficacia de expresión
tecnica muy laboriosa
necesita celulas aisladas
se suele hacer exvivo
si se hace en embriones se llama TERAPIA GENICA GERMINAL (in vivo) - 104que es la transofrmaocion por retrovirus?modificamos el gen de un retrovirus para que meta el gen en las celulas de interés
se necesita otro virus colaborador, que no tieen secuenencia de empaquetamiento, pero que sumunistra los productos de los genes GAG, POL y ENV para empaquetar el retrovirus modificado
se usa en terapias exvivo
son inestables
no se integran del trodo bien, por lo que se usa poco - 105que es la transofrmaocion por adenovirus?no tienen mecanismos para meterse en un cromosoma
el adn que se recomebina se expresa poco tiempo y se destruye luego
se usa in vivo - 106que utilidad puede tener la pcr para la clonación?Usando PCR, puedes adicionar sitios para enzimas de restricción en el inserto de ADN.
Tu inserto de ADN no debe contener un sitio de restricción interno similar al sitio de restricción en el plásmido ya que la
enzima de restricción puede cortar tu inserto de ADN en este sitio de restricción interno y producir
pequeñas piezas indeseables de fragmentos de ADN. - 107cuantas enzimas de restriccion puedes usar ?una o dos enzimas de restricción para cortar el fragmento de ADN y el vector.
Cuandouses dos enzimas de restricción, ambas enzimas deben ser compatibles o trabajar bien en el mismo buffer
de enzimas de restricción - 108Como se hace una clonación por PCR?se basa en la ligación (meter el inserto usando ligasas)
En este caso, la ligasa mete el producto de la pcr en un plasmido con una COLA T
El prodcuto de la pcr tiene un residuo de adenina en el 3`, que se unirá al T de la cola
se u - 109cuando se usa una clonación por PCR?cuando las enzimas de restricción no son compatibles o existe un sitio de
restricción interno en su inserto de ADN
lo malo es que necesita un vector especifido con cola T, pero los vectores con cola T pueden no tener soporte para la proteina de interés (regiones promotoras o etiquetas) - 110Como se hace una clonación LIGACIÓN INDEPENDIENTE E CLONACIÓN (LIC)?se hace generando secuencias corts en el extremo del inserto de ADN que se alinean a las secuencias cortas en el plasmido vector
Las enzimas con actividad 3’
a 5’ exonucleasa eliminan los extremos 3’ y generan extremos cohesivos entre el fragmento de ADN y el vector lineal.
luego se combinan y alinean
Durante la
transformación, el organismo hospedero repara las secciones rotas salientes formadas en el ADN
recombinante.
ventaja: no crea ningun sitio de restricción o secuencias indeseables en el ADN vinal - 111como se hace una CLONACIÓN LISA o sin costuras?se basa en alinear secuencias cortas del
extremo del fragmento de ADN a secuencias cortas en el plásmido vector.
requiere una enzima de actividad 5-1 exonucleasa para crear proyecciones 3`
requere una adn polimerasa para llenar los vacios
y una adn ligasa para unir lso fragmentos - 112La ventaja de LIC y CL sobre el método de clonación basado en enzimas de restricción es..permite la
inserción de más de un fragmento de ADN dentro del vector
cuando existen sitios para enzimas
de restricción internos en su fragmento de ADN, puedes usar LIC o CL como método de clonación
opcional. - 113Como se hace la clonación por recombinación?hay que usar enzimas recombinasas de ADN sitio-especificas, que intercambian y recombinan piezas de ADN con sisiteos de recombinación particualres
se necesita un plasmido particular, que tiene sitios de recombinación
1º) insertar un fragmento de ADN dentro de un vector de entrada para
generar un clon de entrada
2º)intercambiar y recombinar el clon de entrada con el
clon de destino. - 114ventaja de la clonación por recombinación?puede ser usada para ubicar más de cinco
elementos en un único vector. Esto es comúnmente usado para identificar interacción de unión a proteínas
o para optimizar la expresión de proteínas, purificarlas o solubilizarlas
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- C1 Opos Flashcards on VECTORES CLONACIÓN, created by Aaron Garrido Cabello on 15/03/2026.
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